王姣平

1.武汉大学基础医学院(湖北 武汉 430071) 2.湖北民族学院附属民大医院(湖北 恩施 445000)



慢性粒细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群与病情的相关性研究

王姣平1,2

1.武汉大学基础医学院(湖北 武汉 430071) 2.湖北民族学院附属民大医院(湖北 恩施 445000)

目的 研究慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血淋巴细胞亚群与病情的相关性。方法 选取100例CML患者作为病例组，选取100名健康志愿者作为对照组。对两组研究对象的外周血T细胞亚群、血常规指标进行检测和比较。对病例组患者的骨髓幼稚细胞比例、脾肿大程度进行观察和比较。结果 病例组患者外周血中的CD3+T细胞亚群比例、CD4+T细胞亚群比例、CD4+/CD8+T细胞亚群比值、CD4+CD25+Treg显著低于对照组(P<0.05)，CD8+T细胞亚群比例细胞比例均显著高于对照组(P<0.05)。病例组患者外周血中的HB、RBC水平显著低于对照组，WBC、PLT水平显著高于对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示，CML患者外周血的CD3+T细胞亚群比例、CD4+T细胞亚群比例、CD4+/CD8+T细胞亚群比值与HB、RBC水平均呈正相关关系(P<0.05)，与WBC、PLT、脾肿大程度均呈负相关关系(P<0.05)，患者外周血的CD8+T细胞亚群比例与HB、RBC水平均呈负相关关系(P<0.05)，与WBC、PLT、脾肿大程度均呈正相关关系(P<0.05)，患者外周血的CD4+CD25+Treg细胞比例与HB呈正相关关系(P<0.05)，与骨髓幼稚细胞比例呈负相关关系(P<0.05)。结论CML患者表现为外周血T淋巴细胞亚群的失衡，提示机体存在显著的免疫抑制状态，这些指标水平与患者病情指标具有一定的相关性，可作为反映病情严重程度的辅助指标。

慢性粒细胞白血病；外周血；淋巴细胞亚群

慢性粒细胞白血病(CML)是一种常见的恶性造血系统肿瘤，是一种起源于造血干细胞的恶性疾病，以费城染色体(Ph)、BCR-ABL融合基因为主要基因型特征。虽然造血干细胞移植(HSCT)是针对CML的一线治疗方案，但HSCT在临床应用时面临着诸多难题。随着酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)等靶向治疗药物的应用，CML慢性期患者的预期寿命可达到与正常人群相当的水平，但是这类患者的大多数需要终身服药，治疗依从性较低，而且在治疗的过程中还存在着耐药性、不能耐受性以及TKI不能清除CML干细胞等问题[1-3]。CML患者在发病形式、疾病进展、治疗反应和生存期等方面均具有显著的个体差异，因此，针对CML患者的个体病情和机体状态进行准确评价对于制订临床治疗方案具有重要的意义。T淋巴细胞亚群和免疫功能的紊乱是CML的重要临床表现之一，也是值得临床医务人员高度关注的临床指标，但近年来针对CML患者的T淋巴细胞亚群比例与病情严重程度相关性的研究较少。本研究针对CML患者外周血淋巴细胞亚群与病情的相关性进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月—2016年10月湖北民族学院附属民大医院收治的100例CML患者作为病例组，均符合世界卫生组织(WHO)的CML诊断标准，所有患者均为初诊病例，均未接受免疫化疗或靶向治疗等抗白血病治疗，男75例，女25例，年龄39～79岁，平均(59.2±9.4)岁。选取同期在医院接受体检的健康志愿者100名作为对照组，其中男性72例，女性28例，年龄36～81岁，平均(58.8±10.6)岁，两组研究对象在年龄、性别构成方面的差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 检测指标 采集两组空腹外周静脉血样本置于无菌EDTA抗凝管中，以PBS等比稀释后应用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，并应用细胞培养液调整细胞浓度，抽取细胞悬液加入双荧光标记的CD3、CD4、CD8、CD25单克隆抗体，以mouse IgG1为阴性对照，应用流式细胞仪对T淋巴细胞亚群检测。应用全自动血细胞分析仪XN-2000对两组研究对象的外周血血红蛋白(HB)、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)进行检测。采集病例组所有患者的骨髓样本，由同一位细胞形态学专家进行骨髓涂片检查，对骨髓幼稚细胞比例进行检测，计数方法为取细胞分布均匀处计数200个细胞，幼稚细胞指原始淋巴细胞、幼淋巴细胞、原始粒细胞、早幼粒细胞、原始单核细胞、幼单核细胞的总和，同时对所有患者脾肿大程度进行检查，并根据检查结果将其分为轻度脾肿大、中等脾肿大、重度脾肿大三个级别。

2 结果

2.1 外周血T细胞亚群比例的比较 病例组外周血中的CD3+T细胞亚群比例、CD4+T细胞亚群比例、CD4+/CD8+T细胞亚群比值、CD4+CD25+Treg细胞比例显著低于对照组(P<0.05)，CD8+T细胞亚群比例显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组研究对象外周血T细胞亚群比例的比较

2.2 血常规指标的比较 病例组外周血中的HB、RBC水平显著低于对照组(P<0.05)，WBC、PLT水平显著高于对照组(P<0.05)，见表2。

组别HB/(g·L-1)RBC/(×1012·L-1)WBC/(×109·L-1)PLT/(×109·L-1)病例组90．32±1．683．71±0．25118．24±24．32332．42±51．35对照组136．67±6．7410．46±0．167．13±1．42176．37±28．64t值-66．727-227．41345．60926．541P值<0．05<0．05<0．05<0．05

2.3CML患者外周血T细胞亚群比例与疾病严重程度的相关性 病例组患者的骨髓幼稚细胞比例为(4.68±2.35)%，脾肿大分级为轻度脾肿大37例，中度脾肿大49例，重度脾肿大14例。相关性分析结果显示，CML患者外周血的CD3+T细胞亚群比例、CD4+T细胞亚群比例、CD4+/CD8+T细胞亚群比值与HB、RBC水平均呈正相关关系(P<0.05)，与WBC、PLT、脾肿大程度均呈负相关关系(P<0.05)，患者外周血的CD8+T细胞亚群比例与HB、RBC水平均呈负相关关系(P<0.05)，与WBC、PLT、脾肿大程度均呈正相关关系(P<0.05)，但上述指标与骨髓幼稚细胞比例均无相关性(P>0.05)，患者外周血的CD4+CD25+Treg细胞比例与HB正相关关系(P<0.05)，与骨髓幼稚细胞比例呈负相关关系(P<0.05)，而与其它指标均无相关性(P>0.05)，见表3。

表3 CML患者外周血T细胞亚群比例与疾病严重程度的相关性

3 讨论

本研究结果显示，CML患者外周血T淋巴细胞亚群中CD3+细胞、CD4+细胞表达水平、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+CD25+细胞显著下降，CD8+细胞显著上升，说明CML患者机体表现为明显的免疫抑制状态和免疫功能损害。近年来，针对白血病患者外周血T淋巴细胞亚群的研究未见有涉及CML的专题研究，而主要研究焦点集中于急性白血病方面。沈天行等[4]针对不同类型初发急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群的研究结果显示，急性粒细胞白血病(AML)和急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的CD3+细胞比例均高于健康人群，而急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者的CD3+细胞比例、CD4+/CD8+细胞比值则低于健康人群，B-ALL患者CD4+细胞比例较高，而T-ALL患者的CD4+细胞比例则较低，AML患者的CD8+细胞比例较高，而T-ALL患者和B-ALL患者的CD8+细胞比例升高则不显著，说明不同类型的急性白血病患者的外周血T淋巴细胞亚群比例具有一定的差异。赵鹏[5]的研究显示，随着急性淋巴细胞白血病(ALL)患者接受化疗次数的增加，其外周血T细胞亚群的比例明显失调，表现为CD4+细胞比例下降、CD+8细胞比例上升及CD+4/CD+8细胞比值倒置，而且患者的T细胞亚群变化对于预防性抗真菌感染也具有一定的指导价值[5]。王西阁等[6]针对ALL患儿外周血T淋巴细胞亚群的研究结果显示，不论是初诊ALL患儿还是化疗后缓解ALL患儿，均会出现CD3+细胞和CD4+细胞比例的下降和CD8+细胞比例的上升，而且这两类患儿的T淋巴细胞亚群指标与IL-17、IL-35等血清炎症因子指标均具有相关性。陈荣伴[7]针对AML患者外周血T淋巴细胞亚群及Th1/Th2细胞因子变化水平的研究显示，初诊AML患者外周血CD3+细胞比例、CD4+细胞比例、CD4+/CD8+细胞比值均降低，CD8+细胞比例升高，经过治疗后患者的外周血T淋巴细胞亚群指标可较初诊时出现显著改善，但与健康人群比较仍有较大的差异。孔令君等[8]针对AML患者Treg细胞和NK细胞的研究结果显示，初诊和化疗后缓解AML患者外周血中Treg水平均高于健康人群，而NK细胞比例则低于健康人群，在这一研究报道中，初诊AML患者表现为明显的免疫抑制，而化疗后缓解AML患者外周血T淋巴细胞亚群与健康人群较为接近，这与Treg细胞对CD8+T细胞免疫应答诱导和对NK细胞天然免疫反应的抑制有关，Treg细胞在CD4+细胞与CD8+细胞失衡的过程中发挥着重要的作用[8]。冯秀梅等[9]的研究针对再生障碍性贫血(AA)患者、骨髓增生异常综合征(MDS)患者和AML患者的外周血T细胞亚群进行了对比，结果显示，三类患者外周血中CD4+T细胞转录因子表达水平存在着显著的差异，AML患者外周血CD4+细胞表达水平的下降可能是由于恶性克隆的大量积聚引起[9]。此外，喻霞云等[10]提出白血病患者的细胞免疫功能混乱主要表现在T淋巴细胞亚群绝对数量的减少，故在针对白血病的研究中检测淋巴细胞亚群绝对计数要比检测细胞比例更能够客观反映和判断患者机体的免疫功能状态。虽然上述研究均是针对急性白血病的研究成果，但对于慢性白血病研究也具有借鉴意义，本研究结果与上述研究结果基本一致，这反映了白血病患者外周血T淋巴细胞亚群变化具有一定的特征性。

本研究结果显示，CML患者外周血T淋巴细胞亚群指标与患者的血常规指标、骨髓指标、临床体征均具有一定的相关性，能够作为反映患者病情严重程度的辅助指标。在近年来的研究中，外周血T淋巴细胞亚群被广泛地用于急性白血病患者的疗效监测和疗效评价研究，在指导治疗方面发挥了积极的作用。李学梅等[11]的研究结果显示，急性白血病患儿在治疗过程中存在着显著的细胞免疫功能紊乱，经治疗缓解的患儿细胞免疫功能可发生缓慢的恢复，这为针对患儿应用免疫调节剂进行治疗提供了依据。原永明等[12]的研究结果显示，不论是ALL患者或是CML患者，其治疗前、后的外周血T淋巴细胞亚群变体均与其疗效有关，特别是T淋巴细胞亚群绝对值对于白血病患者的病情监测及判断预测均具有积极的意义。张司琪等[13]的研究结果显示，化疗后达完全缓解的急性白血病患者的Treg细胞比例也会逐渐恢复，Treg细胞会在缓解早期较治疗前增高，动态检测Treg细胞比例对于指导免疫调节治疗也具有一定的临床价值。此外，张玉婷等[14]、朱明霞等[15]、许勇钢等[16]的研究也将外周血T细胞亚群指标作为评价中药辅助治疗白血病疗效的重要指标，这也为白血病患者外周血T细胞亚群指标监测应用研究开辟了新的前景。

综上所述，CML患者表现为外周血T淋巴细胞亚群的失衡，这提示了机体存在显著的免疫抑制状态，这些指标水平与患者病情指标具有一定的相关性，可作为反映病情严重程度的辅助指标。

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责任编辑：牟冬生

Study on the Relationship between Peripheral Blood Lymphocyte Subgroups and Disease Condition in Patients with Chronic Myeloid Leukemia

Wang Jiaoping1,2

(1.TheBasicMedicalSciencesSchoolofWuhanUniversity,Wuhan430071,China; .TheAffiliatedHospitalofHubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China)

Objective To study and analyze the relationship between peripheral blood lymphocyte subgroups and disease condition in patients with chronic myeloid leukemia (CML).Methods 100 CML patients were selected as the case group and 100 healthy volunteers were selected as the control group.The T lymphocyte subgroups in the peripheral blood and the blood routine indicators of the subjects in the two groups were detected and compared.The percentage of immature cells in the bone marrow and the degree of splenomegaly of the patients in the case group were observed and compared.Results The percentages of CD3+T cell subgroup,CD4+T cell subgroup,CD4+CD25+Treg cell subgroup and the ratio of CD4+/CD8+T cell subgroup in peripheral blood of the patients in the case group were significantly lower than those in the control group but the percentage of CD8+T cell subgroup was significantly higher than that in the control group (P<0.05).The HB and RBC levels in the peripheral blood of patients in the case group were significantly lower than those in the control group, and the WBC and PLT levels were significantly higher than those in the control group (P<0.05).The correlation analysis showed that the percentages of CD3+T cell subgroup,CD4+T cell subgroup and the ratio of CD4+/CD8+T cell subgroup of the patients with CML was positively correlated with HB and RBC level (P<0.05) and was negatively correlated with WBC,PLT level and the degree of splenomegaly (P<0.05).The percentages of CD8+T cell subgroup of the patients with CML was negatively correlated with HB and RBC level (P<0.05) and was positively correlated with WBC,PLT level and the degree of splenomegaly (P<0.05).The percentage of CD4+CD25+Treg cell subgroup was positively correlated with HB level (P<0.05) and was negatively correlated with the percentage of immature cells in the bone marrow (P<0.05).Conclusions CML patients show the imbalance of T lymphocytes subgroups in peripheral blood,which suggests that there is a significant immune suppression status in the patient. Such indicators have a certain correlation with the condition of the patient′s diseases,which can be used as supplementary indicators to reflect the severity of the disease.

chronic myeloid leukemia;peripheral blood;lymphocyte subgroups

王姣平 (1981- ) ，女，湖北天门人，主管检验师，硕士在读，研究方向:血液病的检测、诊断及疗效观察。

R

A

1008-8164(2016)04-0010-04

2016-10-28