王永刚, 孙尚琛, 马雪青, 秦健宇, 冷非凡

(1.兰州理工大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050； 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所，甘肃 兰州 730046)



Ca2+和Sr2+诱导大肠埃希菌感受态细胞的形成及转化的影响

王永刚1, 孙尚琛1, 马雪青2, 秦健宇1, 冷非凡1

(1.兰州理工大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050； 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所，甘肃 兰州 730046)

为研究金属离子诱导下感受态细胞形成的机理及揭示转化发生的机制，分别用Ca2+和Sr2+(0～140 mmol/L)制备大肠埃希菌感受态细胞并转化。研究结果表明，不同浓度的Ca2+和Sr2+诱导的感受态细胞的效价不同，两种金属离子对大肠埃希菌细胞内外膜的通透性均有较大影响，但细胞内外膜的改变程度与转化率无直接关系；电镜结果显示，未处理的细胞呈簇聚集发生粘连现象，感受态细胞整体呈分散状态，局部发生聚集，而转化后的细胞独立存在，边缘异常清晰。

Ca2+； Sr2+； 通透性； 感受态细胞；转化

质粒转化感受态细胞是基因工程中常用的手段之一。早在1970年，Mandel等[1]研究发现，一定浓度的Ca2+可以诱导大肠埃希菌形成感受态细胞，摄取外源DNA。Chu等[2]从Micromonosporaechinospora的细胞壁中提取肽聚糖并研究了肽聚糖、庆大霉素和金属离子之间的吸附关系。研究发现，金属离子与庆大霉素可以竞争性吸附肽聚糖，在金属离子存在下，肽聚糖对庆大霉素的吸附量很少。 Subrata等[3]研究发现DNA与脂多糖(LPS)有较强的结合作用，且DNA-LPS复合物在Ca2+浓度为100 mmol/L时结合作用最强，DNA的超螺旋结构最紧密。关于金属离子在感受态细胞的形成及转化发生中的生理机制尚不明确，一般认为是宿主细胞在低温、金属离子的刺激等条件下，细胞膜的通透性发生了变化，进而为外源DNA的进入提供了条件。……