郑小龙，王 群，邓明俊，张晓文，孙明君，朱来华

(山东出入境检验检疫局，山东青岛 266002)



西方马脑炎病毒TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立

郑小龙，王 群，邓明俊，张晓文，孙明君，朱来华

(山东出入境检验检疫局，山东青岛 266002)

通过RT-PCR从西方马脑炎病毒(WEEV)中扩增得到1317bp特异的保守序列，将其克隆到pMD-20T载体中，进行体外转录，制备标准品cRNA。以10倍比稀释的cRNA为模板，进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线，建立了WEEV荧光定量RT-PCR检测方法。对建立的方法进行了特异性和敏感性试验。结果表明，建立的荧光定量RT-PCR方法最低可检测10拷贝的cRNA；且与马鼻肺炎病毒(EHV-1)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV,H3N8)、西尼罗病毒(WNV)、东方马脑炎病毒(EEEV)和日本脑炎病毒(JEV)不发生交叉反应。与常规RT-PCR相比，该方法更加快速，特异性和敏感性更高,灵敏度为常规RT-PCR方法的100倍。

西方马脑炎病毒；TaqMan MGB；荧光定量RT-PCR

西方马脑炎病毒(Wastern equine encephalitis virus,WEEV)属于披膜病毒科甲病毒属，是引起西方马脑炎的病原体。该病毒可经呼吸道传播感染，但主要通过蚊虫传播[1]。西方马脑炎可引起人和马发病，病马常呈亚临床症状，病死率低于30%；WEEV对人的致死率明显低于东方马脑炎病毒[2-5]。该病在北美西部呈地方性流行，主要分布于加拿大、美国西部和中部，南美一些国家也有该病发生，如巴西、阿根廷、智利、秘鲁和乌拉圭等国家[6]。

西方马脑炎在我国也有报道，1990年何海怀等[7]从新疆乌苏县采集的按蚊和博乐县采集的全沟硬蜱中分离出WEEV。吕新军等[8]在对我国人体血清调查中发现，WEEV抗体的阳性率为2.71%，但在马属动物中的流行情况未见相关报道。……