马松亚 ，蒋维昕 ，2，屈林丰 ，曹雪宁 ，谭 玲 ，杨 梅 ，2

（1. 广西大学 林学院 ，广西 南宁 530004；2. 广西林业科学与工程高校重点实验室，广西 南宁 530004）

桉树无性系叶片蛋白质组双向电泳体系优化

马松亚1，蒋维昕1，2，屈林丰1，曹雪宁1，谭 玲1，杨 梅1，2

（1. 广西大学 林学院 ，广西 南宁 530004；2. 广西林业科学与工程高校重点实验室，广西 南宁 530004）

为了建立适用于桉树叶片蛋白质组研究的双向电泳体系，以尾叶桉Eucalyptus urophyllas广林4号无性系作为试验材料，对蛋白质样品获取方法、双向电泳等电聚焦胶条pH范围、蛋白质上样量、胶条平衡条件以及染色方法进行了优化。结果表明：提取液+酚抽提法最适合桉树叶蛋白质的提取，电泳图谱可检测到850个蛋白质点。7 mol/L尿素+2 mol/L硫脲+4% Chaps+60 mmol DTT 10 µL的蛋白质干粉裂解液，裂解效果较好；使用50 mg蛋白质干粉和600 µL裂解液所获得的蛋白质浓度较高，为3.97 µg/µL。使用 pH4～7、24 cm IPG胶条，蛋白质上样量为1 200 µg，并加入375 mg碘乙酰胺，采用考马斯亮蓝染色，获得的蛋白点清晰，没有拖尾现象，条纹极少，分布较均匀。

桉树；叶片；蛋白质组；无性系；双向电泳

蛋白质组学研究的目的是为了弄清某一生物体中基因编码的所有蛋白质，建立蛋白质组学数据库，并着重于寻找和筛选任何有意义的两个材料之间的差异蛋白质谱，揭示细胞生理和病理状态的进程与本质、对外界环境刺激的反应途径以及细胞调控机制，同时对某些关键蛋白进行定性和功能分析[1]。在植物的生存环境中，会受到非生物因子胁迫,这些胁迫可以引起大量的蛋白质在种类和表达量上的变化。……