国小红

(泰安市中医医院 风湿免疫科，山东 泰安 271000)



增液汤对原发性干燥综合征小鼠干预作用实验研究

国小红

(泰安市中医医院 风湿免疫科，山东 泰安 271000)

目的:观察增液汤对干燥综合征(SS)小鼠的脾脏指数、血清TNF-α、血清INF-γ、血流变的干预作用。方法:50只小鼠，随机分为正常组、模型组、增液汤低、中、高剂量组，自身同种鼠抗原合并百白破疫苗造模，增液汤连续灌胃6周，实验末检测SS小鼠的脾脏重量及指数，血流变，血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)等指标。结果:与正常组动物比较，模型组小鼠脾脏重量、指数升高，TNF-α、INF-γ、ηL、ηH、RV升高；与模型组比较，增液汤中、高剂量组脾脏重量、指数降低，TNF-α、INF-γ、ηL、ηH、RV降低。结论:增液汤可干预SS小鼠的脾脏指数、血清TNF-α、INF-γ及血流变，其治疗SS的机制可能与干预其免疫平衡有关。

增液汤；干燥综合征；脾脏指数； TNF-α；INF-γ；血流变

干燥综合征(Sjogren′s syndrome, SS)是一种因遗传、内分泌异常等因素引起的以外分泌腺功能异常为主的多器官受累的慢性、自身免疫性疾病。目前SS的发病机制尚未完全明确，现代医学认为，SS的发病主要与免疫失衡、内分泌异常、外分泌腺细胞凋亡异常等原因有关，尚无安全有效的治疗药物[1]。近年来，中医药调节免疫功能的作用逐渐被证实[2-3],中医药因其对机体免疫功能良好稳定的调节作用及安全性，在SS治疗中展现出优势。增液汤是《温病条辨》中用于阴液亏虚的基础方，本研究主要探讨增液汤对SS小鼠的干预作用，进而探索其对SS小鼠的调节机制。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 实物动物 雌性SPF级C57BL/6小鼠，18-22 g，购自中国食品药品鉴定研究院，许可证编号：SCXK(京)2009-0120，饲养环境12 h明暗交替，温度20～23 ℃，相对湿度40～60%。

1.1.2 主要仪器与试剂 AL204精密分析天平，上海迅达医疗器械公司；DL - 5 低速离心机,郑州长城科工贸易有限公司；XD711酶标仪，美国 TOLEDO公司； LBY - N6B 型血液黏度仪,北京普利生仪器有限公司;弗氏完全佐剂，Sigma,USA,Lot:038K9719；吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗，成都生物制品研究所，批号082012；TNF-α ELISA试剂盒，美国R&D公司，批号：20150820CN；INF-γ ELISA试剂盒，美国R&D公司，批号：20151001BV。

1.2 实验方法

1.2.1 分组及给药 56只小鼠中随机选6只取下颌腺制备抗原，剩余50只随机分为：正常组、模型组、增液汤低剂量组、增液汤中剂量组、增液汤高剂量组，每组10只。除正常组及6制备抗原小鼠外，其余小鼠均采用自身同种鼠抗原合并百白破疫苗造模。

1.2.2 抗原制备 随机取6只小鼠下颌腺，分离包膜及结缔组织，剔除淋巴结，生理盐水洗净，剪碎，冰浴中5000 r/min匀浆20 s后，于4 ℃ 3000 r/min离心10 min，低温环境下吸出抗原上清液，置于试管中。测定蛋白浓度后，生理盐水中制成0.4 mg/mL浓度上清液，并加入弗氏完全佐剂，制成0.2 mg/mL终浓度的乳化抗原液[4]。

1.2.3 造模方法 除正常组外，在每组小鼠两侧腹股沟及两后脚掌皮下多点注射乳化抗原液，每只注射总量为1mL，首次免疫后第21，35 d，再次使用乳化抗原液加强免疫，方法同首次免疫；在首次免疫当天，及首次免疫后第7，21，35 d，每组小鼠腹腔注射百白破疫苗0.1 mL以加强免疫[5]。

1.2.4 给药方法 增液汤低、中、高剂量组分别于首次免疫后，根据人与小鼠体表面积换算等效剂量的1倍、2倍、4倍剂量为低、中、高剂量，即以增液汤(8.75 g/kg/d、17.5 g/kg/d、35 g/kg/d)剂量灌胃。正常组及模型组给予等量生理盐水灌胃，共给药6周。

1.3 检测指标

1.3.1 血流变 实验末动物禁食12 h，麻醉后眼眶取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，取0.8 mL全血，采用LBY-N6B型血液黏度仪测定低切变率下全血粘度(ηL)、高切变率下全血粘度(ηH)及全血还原粘度(RV) 。

1.3.2 脾脏指数 动物禁食后称取体重，取脾脏后称量脾脏重量。

脾脏指数=脾脏质量(g)/小鼠体重(g)×10。

1.3.3 血清TNF-α、INF-γ 眼眶取血后，将血以3000 r/min离心10分钟后取血清，使用酶联免疫法(ELISA)，根据试剂盒说明书检测血清TNF-α、INF-γ含量。

2 结果与分析

2.1 各组小鼠脾脏重量及脾脏指数的比较

表1 各组小鼠脾脏重量及脾脏指数

注: A：P<0.01 vs Normal Group；b：P<0.05 vs Model Group；B：P<0.01 vs Model Group，下同。

Note：A means significant difference at levels of 0.01 compared with Nor

由表1可知，与正常组比较，模型组小鼠脾脏重量及脾脏指数均升高(P<0.01);与模型组比较，增液汤低、中、高剂量组小鼠脾脏重量及脾脏指数均降低，其中，增液汤中、高剂量组脾脏重量及脾脏指数降低具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)，尤以高剂量组更为显著(P<0.01)。说明增液汤可能对SS小鼠的免疫器官有调节作用。

2.2 各组小鼠血清TNFα、INFγ的比较

由表2可知，与正常组比较，模型组小鼠TNF-α、INF-γ均升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较，增液汤低、中、高剂量组小鼠血清TNF-α、INF-γ均降低，其中，增液汤中、高剂量组血清TNF-α、INF-γ降低具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)，尤以高剂量组更为显著(P<0.01)，说明增液汤对SS小鼠的血液免疫因子有调节作用。

表2 各组小鼠血清TNFα、INFγ水平

2.3 各组小鼠血流变(ηL、ηH、RV)的比较

与正常组比较，模型组小鼠ηL、ηH、RV均升高(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，增液汤低、中、高剂量组ηL降低，具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)，尤以高剂量组更为显著(P<0.01)；与模型组比较，增液汤中、高剂量组ηH均显著降低，具有统计学意义(P<0.01)；与模型组比较，增液汤中、高剂量组RV均不同程度降低，具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；其中，增液汤高剂量组RV降低尤为显著(P<0.01)。说明增液汤可调节SS小鼠的血流变，增液汤对原发性干燥综合征小鼠的干预作用实验研究。

表3 各组小鼠血清ηL、ηH、RV水平

3 结论与讨论

增液汤是《温病条辨》中用于増液润燥的经典方剂，由玄参、生地、麦冬三种中药组成。既往研究证实，增液汤可改善干燥综合征患者眼干、口干的症状[6]，以及改变高热动物的血流变的研究[7]。SS是慢性炎症性自身免疫病，其发病与T细胞过度活化引起的免疫失衡及免疫器官损害及炎症有关[8-9]。増液汤中三味单味中药的药理实验证实：麦冬中多糖能显著抗缺氧、增加小鼠的脾脏重量，调节小鼠免疫机能[10]。玄参主要含有的环烯醚萜、苯丙素苷、三萜皂苷和有机芳酸，具有抗炎作用[11]；生地黄可调节大鼠的全血高切粘度、全血低切粘度、血浆粘度[12]。鉴于增液汤三个单味药对免疫、炎症、血流变的作用，本研究检测了增液汤复方对SS小鼠脾脏指数、TNF-α、INF-γ及血流变的影响。

Th1细胞主要产生TNF-α，Th2细胞主要产生INF-γ。TNF-α是一种促炎细胞因子，主要由巨噬细胞和单核细胞产生，参与炎症反应和免疫反应。在许多病理状态下TNF-α产生增多，包括风湿免疫类疾病。INF-γ只由活化T细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)产生，具有抗病毒、免疫调节等特性。研究显示，TNF-α、INF-γ在SS发病中起重要作用，T细胞亚群的比值及数量异常造成的TNF-α、INF-γ分泌异常及免疫功能异常时SS的重要病理机制[13-14]。本研究结果证实，增液汤对TNF-α、INF-γ 的下调作用可能是其治疗SS的另一可能机制，另外，增液汤对SS小鼠脾脏质量及脾脏指数的调节作用也佐证了这一点。增液汤对干燥综合征小鼠血流变也有改善作用，推测这是其治疗干燥综合征症状的机制之一。

综上，增液汤可干预其炎症因子及免疫失衡状态，改善SS小鼠的血流变，这可能是增液汤治疗SS的重要机制之一。

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(责任编辑： 马世堂)

Study of the Intervention of Zengye Soup on Sjogren's Syndrome Mice

GUO Xiao-hong

(Rheumatism Immunity Branch, Tai′an Traditional Chinese Medicine Hospital, Tai′an 271000, China)

Objective: To observe the intervention of Zengye Soup on spleen index, serum TNF-alpha, serum INF - gamma, hemorrheology of Sjogren′s syndrome (SS) modal mice.Methods: 50 mice were divided into normal group, model group, low dose Zengye soup group, medium dose Zengye soup group and high dose Zengye soup group randomly, SS model mice were made by injecting the same rat submandibular immune antigen and the DPT vaccine. Zengye soup was performed for 6 weeks. At the end of the experiment, the spleen weight and index, hemorrheology, serum TNF-alpha and INF-gamma indicator of mice were tested. Results: Compared with normal group mice, model group mice spleen weight and index, TNF-alpha, INF-gamma, ηL、ηH、RV increased; Compared with model group, spleen weight, index, TNF-alpha, INF-gamma, ηL、ηH、RV of the mice of medium dose and high dose group decreased.Conclusion: Zengye soup can adjust spleen index, serum TNF-alpha, INF-gamma and hemorrheology of the SS mice, the mechanism that Zengye soup treat for SS may be related to the intervention on the immune balance.

Zengye soup; Sjogren's syndrome; Spleen index; TNF-alpha; INF-gamma; Hemorrheology

2016-07-01

河北省中医药管理局科技项目(2014082)。

国小红(1980-)，女，山东省梁山县人，硕士，主治医师，主要从事风湿免疫疾病研究。

R285.5

A

1673-8772(2016)05-0041-04