杨显超，吴秀娟，李凯航，杨德全，鞠厚斌，葛菲菲，王　建（上海市动物疫病预防控制中心，上海　201103）

液相芯片技术同时检测六种猪繁殖障碍病毒的方法研究

杨显超，吴秀娟，李凯航，杨德全，鞠厚斌，葛菲菲，王建
（上海市动物疫病预防控制中心，上海201103）

在GenBank中收集猪细小病毒（PPV）结构蛋白VP2基因、猪圆环病毒2型（PCV2）的ORF2序列、猪伪狂犬病毒（PRV）的gB基因、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的NSP2基因、猪瘟病毒（CSFV）的E2基因和乙型脑炎病毒（JEV）的M基因，利用Primer 5.0等分子生物学软件对收集的序列分析比较，筛选出上述基因的特异保守序列并设计引物和探针，将设计好的探针与相应的微球偶联，优化条件，建立检测方法。结果表明：建立的检测PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV 6种病毒核酸的多重液相芯片技术具有较好的特异性、敏感性和稳定性，对PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV 6种病毒核酸的最低检出量分别为8.50×102copies/µL、2.87×102copies /µL、2.07×102copies /µL、2.61×102copies/µL、2.34×102copies/µL、2.05×102copies /µL，与相应病毒 PCR/RT-PCR 检测方法相比，敏感性提高了 100～1 000倍；对临床388份样品同步进行荧光PCR与液相芯片检测，结果99.87%相符。本方法为液相芯片技术在动物多病毒快速高通量检测、鉴别诊断等应用方面奠定了基础。

液相芯片技术；猪繁殖障碍病毒；检测方法

随着养猪业规模化和集约化发展，猪繁殖障碍疫病已成为大中型猪场最重要的疫病之一。在引起猪繁殖障碍的诸多病原中，猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和日本脑炎病毒（JEV）是较为常见的RNA病毒，猪圆环病毒 2 型（PCV-2）、猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病毒（PRV）被认为是引起母猪繁殖障碍性疾病的重要DNA病毒。而且近年来猪繁殖障碍病呈现混合感染的特点，给养猪业造成了巨大的经济损失。……