王嘉伟　闫婉婉　张巫凡　张聪　王臣

摘要：传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的主要以破坏雏鸡法氏囊中枢免疫器官为发病机理的传染病，给我国的养鸡业带来了巨大经济损失。为研制具有良好免疫效果的免疫肽，本实验用人工合成的法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ和传染性法氏囊疫苗共同免疫雏鸡群，通过对体液免疫指标的检测来评价其对传染性法氏囊疫苗的免疫增强作用。结果表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能够促进雏鸡中枢免疫器官法氏囊的生长发育，同时对传染性法氏囊疫苗具有免疫增强作用，为进一步的研究奠定了基础。

关键词：法氏囊；法氏囊活性肽BSP-Ⅱ；体液免疫

传染性法氏囊病具有发病突然、传播速度快、病程短、发病率高的特点。是近些年来严重危害我国养鸡业的主要传染性疾病之一。由于传染性法氏囊病的病原存在容易变异和损害中枢免疫器官的特性，因此该病的疫苗研制、开发以及临床上的应用都是一个持续性的难题。研究表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能够促进B、T淋巴细胞的生成，增强淋巴细胞转化成浆细胞时产生抗体的能力。还能够提高机体抗过氧化应激的能力，是具有广泛应用前景的免疫调节剂。本研究拟以传染性法氏囊疫苗联合人工合成的BSP-Ⅱ免疫鸡，通过对免疫指标水平的检测来评价BSP-Ⅱ对传染性法氏囊疫苗的免疫增强作用，为进一步研究开发新型免疫佐剂奠定基础。

一、材料与方法

1.试验材料。健康非免疫来航雏鸡105只，购于洛阳现代禽业有限公司；传染性法氏囊弱毒苗购自辽宁益康生物制品有限公司；传染性法氏囊标准强毒株（BC6/85株）由本实验室保存。

2.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ的设计及合成。法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ根据TPSGLVY氨基酸序列由上海科肽生物科技有限公司合成，纯度达95%以上。

3.动物的分组及免疫。将105只雏鸡分为三组：空白组、单独疫苗组、疫苗+BSP-Ⅱ组，每组35只。口服途径对雏鸡进行免疫接种。剂量：空白组（生理盐水0.5ml/只）；疫苗组（传染性法氏囊弱毒苗1头份/只）；疫苗+BSP-Ⅱ组（传染性法氏囊弱毒苗1头份/只+BSP-Ⅱ10ug/只）；首免后间隔一周进行第二次免疫。

4.雏鸡法氏囊指数的测定。首免后7 d、14 d采集法氏囊。测定雏鸡法氏囊指数。

5.雏鸡AGP抗体效价的测定。将雏鸡在首免后14 d分离得到的血清用琼脂扩散实验测其AGP抗体效价。

6.数据统计学分析。采用SPSS17.0软件进行计算分析，不同组间比较采用单因素方差分析，各组之间存在显著性差异用*（P<0.05）表示；各组之间存在极显著差异用#（P<0.01）表示；各组之间不存在显著性差异用（P>0.05）表示。

二、结果与分析

1.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ对雏鸡法氏囊免疫器官生长发育的影响。通过spss软件分析得出在首免后7 d、14 d疫苗+BSP-Ⅱ组与空白组存在显著性差异（P<0.05），疫苗组与空白组之间不存在显著性差异（P>0.05），如图1所示。由此可知，传染性法氏囊疫苗对雏鸡法氏囊中枢免疫器官的生长发育没有影响，但法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能够促进雏鸡中枢免疫器官法氏囊的生长发育。

2.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ对雏鸡AGP抗体效价的影响

24-48 h观察琼脂平板培养皿，经过最后的计算得出空白组的平均雏鸡AGP抗体效价趋于0；单独疫苗组的平均雏鸡AGP抗体效价为6；疫苗+BSP-Ⅱ组的平均雏鸡AGP抗体效价为8；如图2所示，可以得出法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ对传染性法氏囊疫苗具有免疫增强的作用。

三、讨论

传染性法氏囊病具有发生速度和传播速度快的特点，鸡舍中一旦发现有感染的鸡时，在短时间内所有鸡均可被感染，严重鸡群的死亡率可高达60%。对于畜牧业来说，本病一旦发生就会造成极大的经济损失。法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ是从法氏囊中分离出的又一种活性小肽，既可以从鸡或其它禽类的法氏囊组织中提取，也可以人工化学合成，合成时成本很低，可以大量制备。实验结果表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ作为佐剂既能够促性雏鸡法氏囊中枢免疫器官的生长发育，而且能够增强传染性法氏囊疫苗所诱导的AGP抗体水平。这为法氏囊活性肽的进一步研究与生产实践中的应用奠定了理论基础。