吴基任，余欢欢，云 玭，吴丽姣，唐志理

(1 海南省食品检验检测中心，海南 海口 570203；2 儋州市食品药品检验所，海南 儋州 571700)



保健食品中维生素A的含量测定

吴基任，余欢欢，云 玭，吴丽姣，唐志理

(1 海南省食品检验检测中心，海南 海口 570203；2 儋州市食品药品检验所，海南 儋州 571700)

对保健食品中维生素A的含量测定进行研究，补充完善了维生素A的含量测定方法。采用高效液相色谱二极管法，ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6 mm×150 mm，5 μm 色谱柱，流动相：甲醇；流速：1 mL/min；检测波长：294 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。维生素A在5～100 μg/mL范围内线性关系良好，R2=0.9999.本法专属性强，重现性好，灵敏度高，可作为保健食品中维生素A的含量测定的方法。

高效液相色谱；保健食品；维生素A；含量测定

维生素A是一种脂溶性维生素，又称视黄醇或抗干眼病因子，是一个具有脂环的不饱和一元醇，包括维生素A1、A2两种，是一类具有视黄醇生物活性的物质[1]。由于维生素A2的活性比较低，所以通常所说的维生素A是指维生素A1。维生素A是人体所必须的营养素，主要存在于于菠菜、胡萝卜、南瓜、动物肝脏、全脂奶及禽蛋中，因其具有调节表皮及角质层新陈代谢、减少皮脂溢出、有效预防肥胖脱发，可以抗衰老，去皱纹，保持柔润肌肤，而备受广大女性青睐[2-3]。在临床上常用维生素A防治夜盲症、视力减退及防治抗呼吸系统感染。其他功能方面还有，有助于免疫系统功能正常；有助于对肺气肿、甲状腺机能亢进症的治疗等[4]。但是，过量服用也会对人体造成伤害，如过度兴奋、呕吐、头疼、腹痛、肌痛、皮肤搔痒、脱屑、皮疹、肝脾肿大、出血、肾脏病变等。因此开发其准确的检验方法，从而确保其在保健食品中含量是精确的尤为重要。目前检测维生素A的标准方法主要有比色法、高效液相色谱紫外法、高效液相色谱荧光法[5-6]，都是普通食品、肉制品和饲料的检验标准，保健食品中维生素A的含量测定目前还没有国家或行业检验标准方法。

本文采用高效液相色谱二极管法测定保健食品中维生素A的含量，结果精密度高，加标回收率稳定性良好。

1 实 验

1.1 材料与试剂

样品为药品超市购置的维生素A片；复合维生素片；鱼肝油。

维生素A标准品(100 mg，SUPELCO)；甲醇(色谱纯)；无水乙醇(色谱纯)；抗坏血酸；氢氧化钾；石油醚Ⅰ；无水硫酸钠；α-淀粉酶。

本方法所用试剂除特别说明，均为分析纯，水为Milli-Q纯水器制得。

1.2 仪器和设备

1260型高效液相色谱仪带二极管阵列检测器，安捷伦公司；TU-1901紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；AL204-1C电子分析天平，梅特勒公司；BS-1E数显振荡恒温培养箱，常州凯航公司；Hei-VAP Value(HL)旋转蒸发器，德国海道夫公司；ZNCL-BS 恒温磁力搅拌器，上海越众仪器设备有限公司；Milli-Q超纯水器，美国密理博公司。

1.3 材料与方法

1.3.1 各种溶液的配制[6-7]

氢氧化钾水溶液：称取固体氢氧化钾125 g，加入100 mL水溶解。

抗坏血酸的乙醇溶液(15 g/L)：称取30 g抗坏血酸于2 L容量瓶中，先用少量水溶解，再用无水乙醇定容至刻度。

维生素A标准储备液配制：精密称取维生素A标准品，用乙醇溶解。

标准溶液的标定：维生素A标准储备液临用前用紫外分光光度法标定准确浓度，取储备液V μL至10 mL容量瓶中，乙醇定容，用10 mm的石英比色皿，在325 nm下测定紫外吸光系数A，按公式(1)计算维生素A浓度。

(1)

维生素A的1%比吸光系数为E为1835。

将标定好的维生素A用甲醇配制成5、10、20、40、60、80、100 μg/mL系列标准溶液，待用。

1.3.2 色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6 mm×150 mm，5 μm；流动相：甲醇；流速：1.0 mL/min；检测波长：325 nm；柱温：35 ℃；进样体积：20 μL。

1.3.3 供试品溶液制备[7]

1.3.3.1 不含淀粉试样(鱼肝油)

称取混合均匀的试样5.00 g 于250 mL具塞三角瓶中，用约50 mL 50 ℃水溶解，混合均匀，加入约100 mL抗坏血酸的乙醇溶液,摇匀后加入25 mL氢氧化钾水溶液，摇匀，加入磁力搅拌棒一个，盖上胶塞，放入装有500 mL水并预热至55 ℃的2000 mL烧杯中,将烧杯置于恒温磁力搅拌器上，于55 ℃恒温皂化45 min，取出，置于冰水浴中冷却至室温。将皂化液全部转入500 mL分液漏斗中，用少量水冲洗两次，加入100 mL石油醚，轻摇振荡排气，继续振摇3 min后静置分层，将水相转入另一500 mL分液漏斗中，再加入100 mL石油醚进行第二次萃取，共提取三次，合并石油醚液，用水将合并后石油醚液洗至中性，然后将石油醚液通过无水硫酸钠过滤除水，滤液收入500 mL旋转蒸发瓶中，于旋转蒸发器上在(40±2) ℃蒸干，用甲醇溶解残渣，转移至50 mL容量瓶中，定容，混匀，0.22 μm滤膜过滤待测。

1.3.3.2 含淀粉试样(维生素AD软胶囊、复合维生素片)

称取混合均匀的试样2.00 g于250 mL的具塞三角瓶中，加入α-淀粉酶1 g，加入50 mL 50 ℃水溶解，盖上瓶塞，置60 ℃培养箱培养30 min。以下步骤按1.3.3.1操作。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 最大波长的选择

在190～400 nm波长范围内对维生素A的标准溶液进行二极管阵列光谱扫描(见图1)结果表明维生素A最大吸收在于325 nm，结合文献[6]，选择325 nm作为本次实验的检测波长。

2.1.2 色谱条件的优化

采用ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱，实验考察了90%甲醇水、95%甲醇水、100%甲醇作为流动相，发现流动相中水的比率越大，维生素A与样品杂质分离度越大，但维生素A出峰时间越慢，综合考虑分离效果和分析时间效率，我们采用100%甲醇作为流动相。

2.2 标准曲线、线性范围

将系列标准溶液在1.3.2提供的色谱条件下分别进样20 μL测定(见图1)，以峰面积A(mAU·s)为纵坐标，系列标准溶液浓度C(μg/mL)为横坐标，得维生素A标准品的标准曲线回归方程，以三倍噪音计算检出限(见表1)。

表1 标准曲线、线性范围及检出限

图1 维生素A光谱图、标准品及样品色谱图

2.3 精密度实验

将浓度为10 μg/mL的维生素A标准溶液重复进样6次，以维生素A的峰面积计算其相对标准偏差(RSD，n=6)，RSD=1.2(见表2)，表明精密度良好。

表2 精密度实验结果

2.4 回收率实验

在已知维生素A含量的三种保健食品中做3个质量浓度水平的加标，每个质量浓度水平做6个平行，按1.3.3章节处理样品，在1.3.2提供的色谱条件下测定，计算每个样品各个加标水平的加标回收率(见表3)，3种保健食品中维生素A回收较好，可用于样品的实际测定。

表3 方法的回收率

2.5 样品测定

表4 样品中维生素A含量

取三种代表性样品按1.3.3处理，所得供试液用甲醇稀释到标准曲线范围内，在1.3.2提供的色谱条件下对该三种代表性样品溶液和维生素A标准溶液进行色谱分析，以出峰时间和二极管阵列扫描光谱定性，峰面积定量，根据线性回归方程计算得三种种保健食品中维生素A含量(见表4)。色谱图显示，维生素A色谱峰并无其他杂质干扰，基线平稳定(见图1)。

2.6 实验注意事项

(1) 样品前处理过程应避光操作，并确保环境温度20 ℃左右；

(2)严格控制皂化时间,并在皂化后迅速冷却皂化液，以保证实验结果准确性及重现性；

(3)因为皂化液为强碱，分液漏斗密闭性要好，实验人员要有必要的安全防护措施。

3 结 论

本实验采用高效液相色谱法二极管阵列检测器检测保健食品中维生素A的含量。上述实验结果说明，该法具有良好线性关系及精密度，稳定的回收率，无其它杂质干扰，是测定保健食品中维生素A的含量的一个实用的分析方法。

[1] 张国珍.食品化学[M].北京：中国农业出版社，1992：22.

[2] 中国营养学会.中国居民膳食指南[M].拉萨：西藏人民出版社，2010:6.

[3] 王光磁.食品营养学[M].北京：中国农业大学出版社，2002:2.

[4] 王镜岩.生物化学[M].北京：高等教育出版社，2002:9.

[5] GB/T5009.82-2003食品中维生素A和维生素E的测定[S].

[6] GB 5413.9-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定[S].

[7] 余欢欢，周玉玲，吴基任，等.保健食品中维生素E的含量测定[J].食品安全导刊,2015(12):168-170.

Determination of Vitamin A in Health Food

WUJi-ren1,YUHuan-huan1,YUNPin2,WULi-jiao2,TANGZhi-li2

(1 Hainan Inspection for Food Control, Hainan Haikou 570203；2 Danzhou Institute for Food and Drug Control, Hainan Danzhou 571700, China)

The content of vitamin A in health food was studied, and the content of vitamin A was improved.Using high performance liquid chromatography diode method, ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6×150 mm, 5 μm column,mobile phase: methanol, Flow rate: 1 mL/min, detection wavelength: 294 nm, column temperature: 35 ℃, sample size: 20 μL, Vitamin A was in the range of 9.61～67.27 μg/mL, had a good linear relationship, R2=0.9999.This method has high specificity, good reproducibility, high sensitivity, can be used as the content of vitamin A in health foods determination.

high performance liquid chromatography; health food; vitamin A; content determination

吴基任(1983-)男，海南海口，本科，轻工工程师，主要研究食品质量检测。13648600012 wujiren7@gmail.com

O657.7+2

A

1001-9677(2016)022-0087-03