张慧荣，冯 杰，赵萍萍，王迎春

(内蒙古大学 生命科学学院，呼和浩特 010021)



长叶红砂咖啡酸-O-甲基转移酶(RtCOMT)基因的克隆及蛋白纯化

张慧荣，冯 杰，赵萍萍，王迎春

(内蒙古大学 生命科学学院，呼和浩特 010021)

长叶红砂(Reaumuriatrigyna)是内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯地区特有双子叶盐生小灌木，有极强的耐盐抗旱性，入药可以治疗湿疹、皮炎等疾病，具有一定的药用价值。咖啡酸-O-甲基转移酶(RtCOMT)是一个重要的甲基化酶，主要调控木质素合成过程中中间产物及木质素的变化。基于高通量测序结果，利用RT-PCR技术克隆获得长叶红砂COMT(RtCOMT)基因，构建RtCOMT原核表达载pET32a-RtCOMT，并将其转化大肠杆菌,重组阳性菌经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测。结果表明：RtCOMT基因开放阅读框长1 023 bp，编码340个氨基酸，推测蛋白分子质量37.24 ku，理论等电点(pI)6.71，发现该基因在大肠杆菌中正常表达得到与预期大小一致的融合蛋白。采用Ni-IDA His-Bind亲和层析方法对RtCOMT重组蛋白进行纯化,体外获得目的蛋白。

长叶红砂；COMT基因；原核表达；蛋白纯化

木质素是包围在维管束细胞和厚壁细胞壁外的一类聚合物, 主要由阿魏酸、 松柏醇和芥子醇3种单体组成，因组成单体不同,可将木质素分为紫丁香基木质素(S-木质素)，愈创木基木质素(G-木质素)和对羟基苯基木质素(H-木质素) 3种类型[1]。木质素作为植物生长发育中的一种植物次生代谢产物,不仅能维持植物结构、输导水分和养料,同时对植物抗倒伏、抗病和抗逆性也有重要影响[2]。但木质素过高会增加工业污染, 降低动物对饲草的消化吸收率,同时也影响一些作物的品质[3]。……