冯帅帅，雒志新，闫 强, 徐 坤，王善禾，邵斯旻，张智英， 王 昕

(西北农林科技大学 动物科技学院，陕西杨凌 712100)



靶向敲除绒山羊lnc15479的CRISPR/ Cas9构建及活性验证

冯帅帅，雒志新，闫 强, 徐 坤，王善禾，邵斯旻，张智英， 王 昕

(西北农林科技大学 动物科技学院，陕西杨凌 712100)

为研究生长期和休止期lnc15479的差异表达在陕北白绒山羊毛囊周期性发育中的作用及功能，利用CRISPR/Cas9技术，在lnc15479的上、下游各设计1个sgRNA靶位点，构建CRISPR/cas9表达载体；并基于SSA修复机制，分别构建含有红色和绿色荧光标记的双荧光报告载体系统。通过将表达载体和报告载体共同转染 HEK293T细胞，检测该CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明，lnc15479的CRISPR/Cas9表达载体成功构建，根据红色和绿色荧光表达情况及细胞计数的方法，该系统的工作效率约为20%。研究结果为进一步分析lnc15479的功能提供技术支持。

CRISPR/Cas9；绒山羊；lncRNA

羊绒由于其纤维具有轻、柔、暖等特点，被誉为“纤维宝石”和“软黄金”，在畜牧业生产中具有重要的经济价值。羊绒是由次级毛囊产生的，其生长是一个动态循环过程，包括生长期、退行期和休止期[1]。长链非编码RNAs(long noncoding RNA，lncRNAs)是一类本身不编码蛋白、转录本长度超过200 nt的非编码RNA，能够在表观遗传调控、转录调控及转录后调控等多种水平上调控基因的表达[2- 3]。前期对陕北白绒山羊羊绒生长期和休止期皮肤组织的RNA-seq结果分析表明，lnc15479在生长期和休止期显著差异表达，q-PCR结果表明该lncRNA在生长期的表达量比休止期高13.98倍(未发表数据)，推测其可能对羊绒的周期性生长具有调控作用。

CRISPR/Cas9(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeat/Cas9)是继ZFN、TALEN之后的第3代基因组定点编辑技术，来源于简单的细菌免疫系统，经过人为改造后，可在真核细胞中实现高度灵活且特异的基因组编辑。……