屈亚平，张智俊，王超莉，王 蕾，吴林军

（浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江 临安 311300）

毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化

屈亚平，张智俊，王超莉，王 蕾，吴林军

（浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江 临安 311300）

毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶（PeKdsD）是2-酮-3-脱氧辛糖酸（KDO）生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）克隆得到毛竹KdsD基因。该基因cDNA全长1 038 bp，编码346个氨基酸；对不同物种来源的KdsD氨基酸序列进行比对和系统进化树分析。结果表明：毛竹的KdsD与玉米Zea mays等植物来源的KdsD有很高的序列一致性，而与微生物来源的KdsD序列一致性较低。毛竹不同组织实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）结果表明：PeKdsD基因在叶中表达量远远高于其他组织。在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KdsD的可溶性高表达蛋白，将大量表达的重组蛋白经过Ni-NTA亲和层析和分子筛层析（SEC）进行纯化，发现KdsD在溶液（30 mmol·L－1三羟甲基氨基甲烷 pH 8.0,200 mmol·L－1氯化钠）中以多种聚体的形式存在；酶学性质测定的结果表明：毛竹KdsD酶最适pH值为pH 8.5，最适作用温度为37℃。此结果为后期研究植物KdsD蛋白的结构与功能奠定了基础。图7参17

林木育种学；毛竹；阿拉伯糖-5-磷酸异构酶；基因克隆；原核表达；蛋白纯化

果胶类多糖广泛分布于高等植物的根、茎、叶、果实等的细胞初生壁和细胞间隙，对细胞组织起着软化和黏合作用，同时还是抵御病原体微生物入侵的天然屏障［1］。2-酮-3-脱氧辛糖酸（KDO）是果胶类多糖鼠李半乳糖醛酸聚糖-Ⅱ（RhamnogalacturonansⅡ，RG-Ⅱ）成分中很少见的八碳糖［2］，在进化过程中非常保守，对花粉管的伸长和生长具有一定的作用［3－4］。……