李敏惠，陈 瑜，蒋玉亮，李 艳，余 赟，毛明星，林定彪，杨亚琼，杨 平△

1.成都医学院 科研实验中心(成都，610083)；2.成都医学院 生物医学系(成都，610083)；3.成都医学院 基础医学院(成都，610083)



·论 著·

纳豆激酶检测体系的建立及其跨膜转运途径初探*

李敏惠1，陈 瑜2，蒋玉亮2，李 艳2，余 赟3，毛明星2，林定彪2，杨亚琼3，杨 平3△

1.成都医学院 科研实验中心(成都，610083)；2.成都医学院 生物医学系(成都，610083)；3.成都医学院 基础医学院(成都，610083)

目的 建立纳豆激酶(nattokinase，NK)酶联检测体系，探讨其跨膜转运机制。方法 采用杂交瘤技术筛选抗NK的单克隆抗体，竞争抑制法鉴定单抗识别的抗原表位，Western Blot测定单抗特异性，双抗夹心ELISA法进行单抗灵敏度测定，Caco-2细胞模型探讨NK跨膜转运机制，生物信息学预测NK穿膜相关序列。结果 筛选得到稳定分泌抗体且特异性识别NK的杂交瘤细胞6株，其中3株单抗识别相近的抗原表位，其余单抗识别不同的抗原表位；6株单抗检测NK的最小灵敏度分布为0.78～20.00 ng/mL；Caco-2细胞模型显示，胞吞作用不是NK跨膜转运的主要途径；生物信息学提示，NK中含有3段穿膜相关序列。结论 基于NK单抗建立的酶联检测体系，可有效监控NK跨膜转运过程，NK可能是依据蛋白转导结构域直接介导而实现其肠道吸收转运。

纳豆激酶；单克隆抗体；跨膜转运；蛋白转导结构域

药物在体内的生物利用度与药物胃肠粘膜通透性相关联，蛋白质、肽类等大分子药物因其膜透过性不甚理想，影响其生物利用度，限制了该类药物的应用[1]。此外，很多具有应用前景的药物受到人体内各种天然屏障(如血脑屏障)的限制也难以到达靶器官或靶细胞发挥药效，可见药物的跨膜转运是药理学研究中一个不可忽视的重点[2]。……