陈 洁， 陈思礼， 吴汇兰

(中南民族大学 生命科学学院， 武汉 430074)



鱼腥藻PCC7120染色体基因对asr0757/alr0758的表达优化及其鉴定

陈 洁， 陈思礼*， 吴汇兰

(中南民族大学 生命科学学院， 武汉 430074)

NCBI预测鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758可能构成一个毒素-抗毒素系统.为研究其是否属于毒素-抗毒素系统家族，分别构建这两个基因的表达载体.用1.0 mM IPTG诱导重组菌表达，优化表达条件，并对表达出的蛋白进行纯化与western blot检测.SDS-PAGE结果显示：asr0757与alr0758在37℃下诱导6 h后，均成功诱导表达出目的蛋白asr0757(13.5 KD)和alr0758(17.9 KD).抗毒素表达量较好，毒素alr0758表达量较少.通过设置诱导时间梯度和IPTG浓度梯度优化毒素基因表达条件，优化结果显示：毒素基因alr0758在28℃，IPTG浓度为0.4 mM，诱导10 h时有最大表达量.蛋白纯化与western blot结果证实诱导表达的蛋白为目的蛋白．

鱼腥藻PCC7120；asr0757/alr0758； 表达； 优化； 鉴定

蓝藻是一种存在于不同的环境中的古老而又多变的原核生物[1]，这种能存在于不同环境中的特性反映了其对多变与极端环境的强大适应能力[2].鱼腥藻PCC7120作为蓝藻中的模式生物，其基因组测序工作于2001年由日本Kazusa研究所最早完成[3].当前，对于蓝藻的分子生物学研究主要集中在基因克隆，表达及功能鉴定与表达调控分析等方面[4]．

有研究表明鱼腥藻染色体上存在大量毒素-抗毒素系统(TAS，toxin-antitoxin system)[5]，TAS的存在有利于鱼腥藻更好地适应环境胁迫.TAS由位于同一个操纵子下的具有多个碱基重叠的两个基因组成，一个编码稳定的毒素蛋白，另一个编码不稳定的抗毒素蛋白[6].当前对毒素-抗毒素系统的功……