姚红伟+高悦勉

摘要：以魁蚶为研究材料，建立了魁蚶的AFLP分子标记反应体系。对其分析过程中的酶切链接、预扩增、选择性扩增等试验条件进行了检测与筛选，得到了清晰的AFLP指纹图谱，为探讨魁蚶种群之间的遗传关系和遗传图谱的构建等方面提供了新的技术手段。

关键词：魁蚶；AFLP；反应体系

魁蚶（Scapharca broughtonii）也叫血贝或赤贝，属软体动物门（Mollusca），瓣鳃纲（Lamellibranchia），翼形亚纲（Pterimorphia），蚶科（Arcidae），是一种大型蚶类。在我国分布海域为黄海、渤海及东海，以黄海北部和渤海较多。AFLP（扩增长度片段多态性）是一种检测DNA多态性的分子标记方法，具有多态性高，DNA用量少，检测效率高，可靠性好，分辨率高和无需预先知道基因组信息等优点。目前AFLP技术在泥蚶[1]、青蛤[2]、大竹蛏[3]、菲律宾蛤仔[4]以及扇贝[5]等贝类中有所应用，但是还未见用于魁蚶研究的报道。本文以魁蚶为实验材料，选用常规PCR试剂和合成引物等化学药品，探索出适合于魁蚶的AFLP分子标记反应体系。

1材料与方法

1.1材料

本实验采用魁蚶的斧足肌肉，活体解剖，-84 ℃保存。所用魁蚶样本采自大连庄河海域的自然群体种贝。EcoRI和MseI引物及人工接头均由上海生工合成，所用主要药品中的剥离硅烷为北京鼎国生物技术有限责任公司产品，亲和硅烷、过硫酸铵、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺为BBI公司产品，蛋白酶K、RNaseA酶为AMRESCO公司产品，MseI内切酶为NEB公司产品，Tap酶为上海生工销售的Roche公司分装产品，T4DNA连接酶和EcoRI内切酶都是Fermentas公司产品。实验所用仪器为PCR扩增仪（MG48+）、电泳仪（DYY-10C）、电泳槽（DYCZ-20B）等。

1.2方法

1.2.1魁蚶基因组DNA的提取魁蚶基因组DNA的提取采用苯酚-氯仿法。……