烟青虫初孵幼虫的高效快速收集方法

2016-11-21王博琳常耘司升云

长江蔬菜 2016年20期

关键词：存活率幼虫人工

王博琳，常耘，司升云

（1.河南平顶山市第一中学，467000；2.武汉市农业科学技术研究院蔬菜科学研究所）

烟青虫初孵幼虫的高效快速收集方法

王博琳1，常耘1，司升云2

（1.河南平顶山市第一中学，467000；2.武汉市农业科学技术研究院蔬菜科学研究所）

比较了常用的烟青虫人工收集方法和新研发的烟青虫初孵幼虫快速收集方法的效果。试验结果表明，与人工收集方法相比，快速收集方法获得初孵幼虫所用时间少，收集的初孵幼虫存活率搞，达96.33%，且收集的幼虫发育更加整齐，雌、雄蛹单头质量（雌蛹295.33 mg，雄蛹284.66 mg）略大；还可节省大量人力，避免了人工挑虫对初孵幼虫的伤害，保障了烟青虫实验种群的大量优质扩繁。

烟青虫；初孵幼虫；快速收集法

烟青虫（Helicoverpa assulta）又称烟草夜蛾，属鳞翅目（Lepidoptera）夜蛾科。烟青虫在田间主要为害烟草和辣椒，为害辣椒时，以幼虫蛀食辣椒的叶片和花果，常年蛀果率为20%～30%，严重为害时，蛀果率高达30%～50%［1，2］，经济损失严重；幼虫可钻入果内，啃食果皮、胎座，并在果内缀丝，排留大量粪便，致使果实不能食用，降低商品价值。

为了降低田间烟青虫为害，为高效防控烟青虫提供科学基础和理论指导，实验室内需要开展针对烟青虫生物学和生态学研究、对化学药剂的敏感度及其变异测定及毒理学参数等试验，因此需要室内继代饲养和繁育烟青虫试虫种群，而抗药性研究中还需要长期保存敏感和抗性或亚致死处理种群等［3］。目前采用人工饲料进行烟青虫室内大规模繁育和继代保种技术已经成功实现，并进一步改进［4］，节约了大量的人力和物力。但是在烟青虫的种群扩繁过程中，其成虫通常在纱布上产卵，当卵孵化后，需要用细小毛笔将初孵幼虫非常小心地从纱布上挑取到人工饲料上饲养，这个过程中存在较多的问题，一是人工挑虫要特别小心，且耗时较长；二是即使非常小心，用毛笔挑取也很容易伤害或者致死初孵幼虫，降低后代饲养数量；三是如果卵在夜晚孵化，则无法及时挑取初孵幼虫到人工饲料上，而幼虫孵化后6 h内接触不到饲料即饿死。因此，如何自动无伤害地收集初孵幼虫一直是烟青虫乃至其他鳞翅目昆虫种群扩繁的制约因子之一。

在实验室饲养烟青虫时，常将装有卵布的塑料袋放置在实验台上，发现孵化后的幼虫清晨全部集聚在朝向窗户一侧，由此推测烟青虫初孵幼虫的趋光性较强。基于此，拟设置黑暗的卵孵化环境，正常环境的装有人工饲料的塑料盒作为幼虫收集盒，二者之间采用玻璃管相通，从收集时间、幼虫存活率和烟青虫蛹质量3个指标研究比较了该方法与常规人工收集方法的不同、优势以及是否适合用于烟青虫初孵化幼虫的收集。

表1　烟青虫幼虫人工饲料配方

1　材料与方法

1.1试虫及人工饲料制作

试验用虫为采集自烟草田的烟青虫幼虫，室内在人工饲料上饲养超过3代。人工饲料的配方参照董钧锋等［4］的方法，具体成分及用量见表1。

其中，大豆粉在用前经高压灭菌锅灭菌处理30 min，蒸熟后自然晾干，用粉碎机再次粉碎备用。麦胚粉制作方法：将小麦粒洗干净，铺于玻璃槽内薄薄一层，每隔12 h洒水1次，保持小麦潮湿，当小麦根长超过种子长度时，再次洗净后放入电热恒温鼓风干燥箱中60℃干燥，最后加工成粉末备用。

人工饲料的具体制作方法如下：按表1所示份量，分别称取各组分。先将琼脂粉倒入不锈钢锅中，然后加入500 mL蒸馏水并在电磁炉上加热，同时不断搅拌，以确保琼脂粉充分溶解。琼脂粉煮沸3次后倒入九阳料理机中，加入称量过的麦胚粉、辣椒粉、麦麸、酵母粉、熟大豆粉及亚油酸，搅拌1 min。搅拌均匀后放在超净工作台内吹风辅助降温，待温度降到50～60℃时，加入山梨酸、尼泊金、抗坏血酸等再次搅拌1 min，最后将搅匀的饲料倒入直径18 cm的灭菌玻璃培养皿中，置于超净工作台中冷却凝固，然后放入4℃冰箱中备用。

1.2烟青虫饲养过程

试虫在养虫室内不接触药剂的情况下一直饲养在人工饲料上。养虫室室内温度（27±2）°C，湿度（60±10）%，光暗周期比为L/D=16 h/8 h。具体饲养过程如下。

①带卵纱布消毒将带卵纱布放入500 mL烧杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，清水漂洗2～3次，置于超净工作台内微风吹干表面水分后放入保鲜袋中，然后放入光照恒温培养箱中等待孵化。

②幼虫饲养初孵幼虫群体饲养，卵孵化4 h内，用软毛笔将初孵幼虫小心接入灭菌的装有足够人工饲料的指形管（平底）内，每管接5头。用灭菌的脱脂棉塞住指形管，幼虫进入3龄后分管饲养，直至幼虫在试管中化蛹，饲料视情况更换。

③蛹老熟幼虫化蛹后第3天，将健康蛹从指形管内取出来，并将雌、雄蛹分别放入标记过的塑料培养皿中（直径90 mm）。随后，放进500 mL烧杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，用自来水冲洗并晾干后，按照雌雄分别放入羽化笼内。

④成虫成虫羽化后转移到交配笼中，并放入浸蘸10%蜂蜜水的脱脂棉供其补充营养。成虫开始在纱布上产卵后，每天更换卵布。

1.3烟青虫初孵幼虫收集

①常规人工收集法带卵纱布上出现初孵幼虫后，在卵孵化4 h内，用软毛笔将初孵幼虫人工接入养虫盒内，养虫盒内加入足够的人工饲料，每盒接100头进行群体饲养。该部分由2位测试者（一位是在实验室工作超过2 a的熟练工人，另一位是在实验室工作不超过半年的非熟练工人）分别采用毛笔人工收集幼虫，再转移到人工饲料上。每个测试处理重复3次。

②快速收集法用1个四周包上黑布的黑色塑料盒子作孵化盒，将消毒后的带卵纱布放入孵化盒中；设置第二个装有人工饲料的幼虫收集盒，孵化盒和幼虫收集盒分别在接近底部的侧面部位开1个圆孔，2个盒子之间用一根棕色玻璃管连接，初孵幼虫白天基于趋光性从玻璃管中间自行爬到幼虫收集盒的人工饲料上去取食；夜间在幼虫收集盒旁边放置一盏打开的LED台灯，借助灯光诱导夜间孵化幼虫爬行到幼虫收集盒中，每个收集盒中初孵幼虫数量达到100头左右时及时更换另外一个新的幼虫收集盒。该处理重复3次。

③幼虫存活率和蛹重将2种方法收集的烟青虫初孵幼虫分别饲养在人工饲料上，饲养8 d后（3龄幼虫阶段），计算存活率，存活率（%）=（初孵幼虫数量-生长至3龄幼虫的数量）/初孵幼虫数量× 100%。将存活幼虫转至指形管内单头饲养至化蛹，化蛹3 d后称取蛹质量；每个处理测定雌、雄蛹质量各20头，设3次重复。

1.4数据处理

用Sigmaplot 12.0作图、SPSS 19.0软件分析差异显著性（p＜0.05），多重比较采用LSD法。

图1　初孵幼虫不同收集方法耗费时间比较

2　结果与分析

2.1不同收集方法耗费时间比较

3种处理耗时差异很大。非熟练工人采用毛笔挑取100头初孵幼虫到饲料上需52.67 min，熟练工人挑取100头初孵幼虫到饲料上需31.33 min，而采用快速收集法更换幼虫收集盒（约计100头/盒）1次，100头幼虫从孵化盒中爬行到幼虫收集盒中耗时13.43 min（图1）。结果表明，对于收集同样数量的幼虫而言，快速收集法将幼虫转移到人工饲料上所需时间显著少于人工挑虫法，可节约大量人力。

2.2不同收集方法的幼虫存活率比较

由表2可以看出，熟练工人挑虫的存活率平均为83.67%，个别超过85%，非熟练工人挑虫成活率低于50%，平均为46.00%，二者之间差异显著；而人工快速收集方法的初孵幼虫存活率达96.33%，远高于非熟练人工挑虫处理的，但与熟练工人挑虫的存活率之间差异不显著，说明该快速收集法能大大提高初孵幼虫的存活率。

2.3不同收集方法的蛹质量比较

由表3可以看出，快速收集法的雌雄蛹质量均略高于人工挑虫处理，但不同收集方法的雌性蛹质量之间、雄性蛹质量之间均无显著差异。从标准差数据来看，快速收集法不同蛹质量之间的差异较小，而人工挑虫法蛹质量之间差异较大，说明快速收集法得到的烟青虫蛹更加整齐。

表2　不同方法收集幼虫的存活率比较

3　小结与讨论

烟青虫成虫趋光性强，很早就有报道［5］，田间也常利用该特点采用频振式杀虫灯有效诱杀烟青虫成虫，降低成虫落卵率，抑制烟青虫的繁殖［6，7］；而关于幼虫趋光性的报道较少，张汉鹄［8］报道，大袋蛾（Clania variegata Snellen）幼虫具有喜光性，常在灌木、矮树等上聚集为害，但未明确不同龄期幼虫间喜光性是否存在差异；另有研究发现，文山松毛虫（Dendrolimus punctatus wenshanensis）幼虫的趋光性强，但不同龄期幼虫对光的敏感度差异及光源强度的高低尚需要进一步研究［9］。

基于前期实验室内的多次观察，确定烟青虫初孵幼虫具有朝向光源的特性，由此设计光源通道，让初孵幼虫自行爬向具有人工饲料的幼虫饲养盒内，大大降低了人工挑虫耗费的大量时间和精力，同时减少了人工操作带来的不可避免的伤害。同时，由该方法得到的初孵幼虫存活率高，后期发育的蛹整齐度高；另外，该法可实现初孵幼虫的优胜劣汰，淘汰不能成功爬行至收集盒内的弱小幼虫；而夜间开启的LED灯还可诱导夜间孵化的幼虫及时爬行到人工饲料上取食，保障了实验种群的大量优质扩繁。该方法可以扩展到其他具有相同特性的鳞翅目昆虫的室内种群饲养及扩繁工作中。

本研究表明，烟青虫低龄幼虫的趋光性强，且证实了初孵幼虫高效快速收集方法的可行性。田间观察也发现，1～2龄烟青虫幼虫通常在叶片和花果向阳的一侧取食，3龄后为害辣椒时则多蛀食果实。生产上可利用此特点，抓住3龄幼虫前这一关键时期，喷施无内吸性的病毒制剂、白僵菌和微孢子虫等生防制剂，或者释放棉铃虫齿唇姬蜂（Campoletis chlorideae Uchida）［10］、中红侧沟茧蜂（Microplitis mediatorHalidag）等防治烟青虫，效果良好。