胡洪柱　秦学娜杨 丹

（1.天津市滨海新区塘沽动物卫生监督所，天津　300450；2.天津市津南区畜牧水产业发展服务中心，天津　300350；3.天津市动物疫病预防控制中心，天津　300402）

H5高致病性禽流感免疫抗体监测及分析

胡洪柱1秦学娜2杨 丹3

（1.天津市滨海新区塘沽动物卫生监督所，天津300450；2.天津市津南区畜牧水产业发展服务中心，天津300350；3.天津市动物疫病预防控制中心，天津300402）

为了全面了解和掌握我县禽流感的免疫效果，科学评价基层免疫工作质量，汇总了从2013-2015年三年的试验结果，共采集血样5888份，合格数量是5147，合格率是87.41%，合格率高于农业部要求的70%的标准，免疫抗体检测结果分析讨论如下。

高致病性禽流感抗体水平监测与分析

禽流感是由A型流感病毒引起多种家禽及野鸟的高度接触性传染病，又名欧洲鸡瘟。高致病性禽流感是世界养禽业最重要的疫病之一[1］，给养禽业带来了巨大的损失。疫苗免疫是一种非常有效的预防疾病发生的方法。在我国是采取以疫苗免疫为主的综合性防治措施来防控本病。为监测已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗体水平，适时指导防疫，对防控高致病性禽流感的发生和流行具有十分重要的作用。因此，笔者对本区2013～2015年高致病性禽流感免疫抗体检测结果分析讨论如下。

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验动物

部分规模鸡场和散养户。

1.1.2血清样品

采集部分规模鸡场和散养户鸡的全血，血液凝固后以3000r/ min离心5min，吸出血清，4度保存。

1.1.3主要仪器

V型96孔微量反应板，离心机，微量振荡器，微量移液器及相配的枪头，灭菌离心管。

1.1.4禽流感标准抗原和阳性血清

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原和阳性血清是购自青岛易邦生物工程有限公司。

1.2试验方法

1.2.1单位抗原的配置

取出冻干的浓缩抗原，加入2ml的生理盐水稀释融化后，测定其抗原效价，能使鸡红细胞完全凝集的抗原的最高稀释倍数，就为该抗原滴度红细胞凝集效价，即沉淀的前一孔为该抗原的效价，此稀释度为1个HA单位抗原，此稀释度除以4即为4个HA单位抗原。

1.2.24单位抗原校正

（1）首先用微量移液枪向反应板的第二孔至第六孔加生理盐水25μl。第一孔不加。

（2）用微量移液枪吸取4单位抗原25μl分别加入第一孔、第二孔，从第二孔开始挤压6次混合，后吸出25μl至第三孔，依次倍比稀释到第5孔，弃去25μl。

（3）1～6孔加25μl生理盐水。

（4）用移液枪再吸取1%红细胞悬液依次加入到1～6孔，每孔25μl。

（5）于微量振荡器振荡1min。室温静置30min后观察结果。

（6）结果观察：第一、二、三孔为完全凝聚，第四孔红细胞为50%沉淀，第五孔为对照完全沉淀，如果出现以上结果，表明所配4单位抗原准确，校正成立。

1.2.3抗体检测方法

按照国标GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》和禽流感微量红细胞凝聚抑制试验（SN/T1182.2-2004）[2］规定，采用血凝抑制试验，集中对血清样品机械实验室检测，并作系统分析。.

2　试验结果

⑴不同年份的见表1，由表1可见2013-2015年共检测5888份血清，2013年的合格率为82.06%，2014年的合格率为87.15%，2015年的合格率为96.21%，近三年整体的合格率为87.41%。

表1 不同年份免疫抗体合格率情况

⑵不同免疫次数与免疫效果的关系见表2，由表2可见，免疫次数越多，合格率越高。

表2 免疫次数与免疫效果的相关分析

⑶不同饲养方式见表3，由表3可见，规模场的合格率远远高于散养户的合格率。

表3 不同饲养方式免疫抗体合格率情况

4　分析与讨论

⑴从以上数据可以看出，近三年我区的高致病性禽流感的抗体水平为87.41%，远远高于农业部规定的70%的要求，有些报道认为[3］，经禽流感免疫接种后的家禽7d可以产生抗体，21d能产生坚强的免疫力，但有的一定的有效免疫时间，我们通过这几年的试验也验证了这一点，免疫1次的合格率仅为31.52%，而免疫2次以上的合格率高达93.83%，随着免疫次数的增加，抗体合格率明显升高，免疫效果与免疫次数成正相关。

⑵规模场比散养户的抗体合格率高，据分析其原因是，规模场防疫意识比较强，管理实行规范化、科学化、常态化。另外，规模场的技术力量强，技术人员操作熟练，保证了禽流感的抗体合格率。而散养户，养殖量小，防疫意识差，免疫工作不到位，所以抗体水平低，存在一定的隐患。

⑶禽流感抗体监测工作是评价和指导防控工作的重要措施，禽流感，尤其是高致病性禽流感，其危害十分严重，疫苗免疫是防止禽流感发生和流行的主要方法，在家禽养殖中，长期对AI的血清学监测是十分必要，这对疫苗的选择、疫苗免疫效果的考察、免疫计划的执行是分成有用的，通过血清学

监测，可以准确掌握疫情动态，根据免疫抗体水平科学地进行综合免疫预防。禽流感防控是一项长期持久的工作，但只要我们认真做好疫情的监测，及时采取有关措施，紧急免疫预防，这样禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消灭的。

[1]刘素梅，杨士清，张连英，等.禽流感区域控制重点环节-抗体监测应用技术的探讨[J］.当代畜牧，2006，（6）：9.

[2]国家标准化管理委员会.SN/T1182.2-2004禽流感微量红细胞凝聚抑制试验[S］.北京：中国标准出版社，2004.