杨朋欣 丁国杰 刘可姝 张春媛 王彬/哈药集团生物疫苗有限公司

水貂出血性肺炎灭活疫苗（B型）生产工艺的建立

杨朋欣 丁国杰 刘可姝 张春媛 王彬/哈药集团生物疫苗有限公司

水貂出血性肺炎是由绿脓杆菌（又称铜绿假单胞菌，Pseudomonas aeruginosa）感染引起的一种高度致死性传染病，多发于每年9至11月份，该菌可通过患病水貂形成的飞沫及气溶胶传播。发病急、死亡快，所以又称铜绿假单胞菌肺炎，以呼吸困难、口鼻出血、突发性死亡为主要特征，死后典型症状为口鼻流出血样泡沫，剖检肺脏呈弥漫性出血。

一般对该病的控制采取抗生素治疗，但该方法易产生耐药性，因此疫苗的制备是控制该病较好的手段，本研究对B型绿脓杆菌疫苗制备生产工艺进行优化，获得安全、免疫效力良好的灭活产品，为水貂多价疫苗和联苗产品的制备提供理论依据。

一、材料

1.菌株。水貂绿脓杆菌血清B型SD004株由哈药集团生物疫苗有限公司研发中心保存。

2.主要试剂及仪器。甲醛溶液和NaCl均购自国药集团；LB和TSB均购自OXOID；发酵罐购自福州福尔流体设备有限公司。

二、方法

（一）一级种子的繁殖

还原绿脓杆菌B型SD004株冻干菌种，划线接种含5%牛血清肉汤琼脂平板，37℃培养过夜，挑取单个典型菌落，接种5.0 ml含5%牛血清肉汤培养基，37℃，180 r/min，培养16 h，经纯检合格后，作为一级种子。

（二）二级种子的繁殖

将检验合格的一级种子按培养基总量的1%接种含5%牛血清肉汤培养基，37℃ 180 r/min，培养16 h，经纯粹检验合格后，作为二级种子。

（三）发酵培……