王文涛，仇建华，段红，常巧呈，路义鑫，王春仁，彭博

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆　163319；2.东北农业大学动物医学学院）

贝氏贝诺孢子虫巢式PCR检测方法的建立

王文涛1，2，仇建华1，段红1，常巧呈1，路义鑫2，王春仁1，彭博

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319；2.东北农业大学动物医学学院）

根据GenBank上发表的贝氏贝诺孢子虫核糖体内转录间隔区（ITS）序列，在传统PCR方法的基础上设计一对特异性内引物，提取病牛血液中贝氏贝诺孢子虫基因组DNA，建立了贝氏贝诺孢子虫巢氏PCR检测方法并进行临床样品检测。结果表明，建立的巢式PCR检测方法能检测到贝氏贝诺孢子虫DNA的最低浓度为24.3 ag·μL-1，刚地弓形虫、犬新孢子虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、边缘无浆体DNA检测均为阴性。196份临床血液样本，检测出3份阳性，阳性率为1.53%。由此可见，研究所建立的巢氏PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性，可用于牛贝诺孢子虫病的早期临床诊断。

贝氏贝诺孢子虫；巢氏PCR；检测；核糖体内转录间隔区

牛贝诺孢子虫病（Bovine besnoitiosis），又称牛球孢子虫病（Bovine cutaneous globidiosis）或橡皮病（elephant skin disease），是由住肉孢子虫科（Sarcocystidae）、贝诺孢子虫属（Besnoitia）的贝氏贝诺孢子虫（Besnoitia besnoiti）寄生于牛眼、皮肤和生殖系统等部位引起的一种原虫病［1］。该病主要引起牛皮肤增厚、龟裂，母牛流产、产奶量下降，公牛精液质量下降，严重时引起死亡，给养牛业造成很严重的经济损失［2］。贝氏贝诺孢子虫（Besnoitia besnoiti）1912年首次由Besnoit和Robin在法国南部发现并报道［3］，2010年欧盟食品安全委员会（EFSA）将牛贝诺孢子虫病列为重要的新兴疾病［4］。……