赵　乐，马利刚，李晓阳，冯卫生，郑晓珂*

( 1. 河南中医学院 药学院，郑州 450046；2. 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，郑州 450046 )



独行菜LaMCT基因的克隆、序列分析与原核表达

赵乐1,2，马利刚1,2，李晓阳1，冯卫生1,2，郑晓珂1,2*

( 1. 河南中医学院 药学院，郑州 450046；2. 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，郑州 450046 )

强心苷作为药用植物独行菜(Lepidiumapetalum)的活性成分，其化学和药理学研究已有良好的基础，但其生物合成途径目前仍不清楚。该研究以独行菜幼苗为材料，通过分析独行菜转录组数据，设计特异性引物，PCR扩增得到了强心苷生物合成MEP途径的关键酶2-C-甲基赤藓醇-4-磷酸胞苷酰转移酶(MCT)基因的开放阅读框(ORF)，命名为LaMCT(Genbank注册号KT832554)，并进行序列分析和原核表达。序列分析结果表明：LaMCT基因ORF全长为912 bp，编码304个氨基酸。亚细胞定位和保守结构域分析结果表明：LaMCT蛋白位于叶绿体中，不含信号肽，没有跨膜区，含有类异戊二烯合成酶保守结构域(isoprenoid synthase domain)。系统进化树结果表明：LaMCT蛋白与拟南芥的MCT蛋白具有94%的序列相似性，亲缘关系较近。通过构建pET-32a-LaMCT原核表达载体，成功在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达LaMCT重组蛋白，并得到了纯化的LaMCT重组蛋白。该研究首次从独行菜中克隆了LaMCT基因，建立其稳定的原核表达体系，为LaMCT蛋白抗体的制备以及研究LaMCT基因在独行菜强心苷类化合物生物合成途径中的功能奠定了基础。

独行菜, MCT, 基因克隆, 序列分析, 原核表达

独行菜(Lepidiumapetalum)是十字花科独行菜属植物，其干燥成熟种子是我国传统中药北葶苈子，具有泻肺平喘、利水消肿的功效(李红伟等，2013)。……