王建华，陈小金，张俊哲，王玉玲，肖　妍，赵　丹，谭旭菲，王乃福，陈本龙，董志珍，赵祥平

（天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津　300456）

H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立

王建华，陈小金，张俊哲，王玉玲，肖妍，赵丹，谭旭菲，王乃福，陈本龙，董志珍，赵祥平

（天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津300456）

根据H1和H3亚型猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）编码基因的保守序列，分别设计合成特异性引物和TaqMan-MGB探针，建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示，该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增，对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（SFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）无交叉扩增反应；用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的 RNA标准对照（SIV-H1-RNA，SIV-H3-RNA），最适线性检测范围分别为3.7×101～3.7×108拷贝数/反应和3.4×100～3.4×108拷贝数/反应，最低检出限分别为38和34个拷贝数；该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%，显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现，进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性，12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性，5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。

猪流感病毒；H1亚型；H3亚型；TaqMan探针；荧光RT-PCR

猪流感（Swine Infl uenza，SI）是由A型猪流感病毒（SIV）引起猪的一种急性、热性、高度接触性和群发性呼吸道疾病，临床上以高热、厌食、咳嗽、呼吸困难和怀孕母猪繁殖障碍为典型表现［1］。……