周晓毓，张佳玉，周曼，贾红霞

(河北大学 化学与环境科学学院，河北 保定　071002)



基于恒温指数扩增反应高灵敏度检测端粒酶活性

周晓毓，张佳玉，周曼，贾红霞

(河北大学 化学与环境科学学院，河北 保定071002)

端粒酶延伸产物是具有(ggttag)n重复序列的DNA.设计1条与2个重复序列相匹配的特异性的DNA探针-(ctaacc)2使其与端粒酶延伸产物杂交，形成双链DNA.过量的DNA探针被磁性石墨烯吸附，通过磁分离去除.利用恒温指数扩增反应(IEXPAR)对端粒酶延伸产物捕捉的DNA探针进行快速的扩增.用与双链DNA特异性结合的SYBR Green I染料对扩增产物进行实时荧光检测.在优化条件下，可以检测到低至50个癌细胞中的端粒酶活性.实现了恒温扩增条件下端粒酶活性的高灵敏度检测.

端粒酶活性；恒温指数扩增反应；磁性石墨烯；实时荧光检测

端粒酶是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶,具有反转录活性.端粒DNA是位于染色体DNA末端特殊的具有重复序列的DNA，对染色体DNA起到保护作用.端粒酶中RNA序列与端粒DNA序列互补.端粒酶与端粒DNA结合后，会以自身的RNA序列为模板，使端粒DNA不断复制[1,2].端粒酶活性在正常细胞(除了永生细胞，像造血细胞、干细胞、生殖细胞等)中很难被检测到，它一般在肿瘤细胞中被激活.肿瘤细胞的强大活力与端粒酶密切相关.通过检测端粒酶的活性，可以实现对肿瘤、癌症的早期诊断.同时以端粒酶为靶标分子，研究有效的端粒酶抑制剂，对开发抗肿瘤药物具有重要意义.即使在癌细胞中……