林红梅, 方长旬, 林瑞余, 何建宇, 林伟伟, 李颖哲, 林文雄

(1.福建农林大学生命科学学院；2.福建农林大学作物科学学院；3.福建省农业生态过程与安全监控重点实验室，福建 福州 350002)



His标签的水稻硅转运蛋白表达载体的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达

林红梅1,3, 方长旬1,3, 林瑞余1,3, 何建宇2,3, 林伟伟1,3, 李颖哲1,3, 林文雄1,3

(1.福建农林大学生命科学学院；2.福建农林大学作物科学学院；3.福建省农业生态过程与安全监控重点实验室，福建 福州 350002)

以水稻根系cDNA为模板，PCR扩增含His标签的Lsi1基因开放阅读框，并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9k中，PCR及测序验证重组质粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.将验证正确的重组质粒pPIC9k-Lsi1通过SacⅠ酶切线性化，电转到毕赤酵母GS115感受态细胞中，通过MD/MM板筛选出甲醇利用快型的酵母转化子，再通过不同浓度梯度的G418平板筛选多拷贝转化菌株.提取酵母基因组，PCR验证正确的菌株即为工程菌(GS115/pPIC9k-Lsi1).用1%甲醇诱导该工程菌72 h后，收集上清，经SDS-PAGE检测到位于32.8 ku处的目的蛋白即为Si转运蛋白(OsLsi1).

巴斯德毕赤酵母; Si转运蛋白; pPIC9k; 异源表达

自1926年Sommer提出硅是水稻良好生长所需要的元素后[1]，越来越多的证据表明，Si对许多作物的正常生长都是有益的，尤其是表现在减轻作物生物胁迫(病害、虫害)和非生物胁迫(营养缺乏，重金属毒害、干旱和盐胁迫)方面[2-5].高等植物吸收硅的能力与硅转运蛋白紧密相关.目前，编码硅转运蛋白的两个控制硅吸收的基因(Lsi1、Lsi2)已被识别[6-7]，其中控制硅吸收基因(Lsi1)定位在水稻2号……