刘敏，杜航，宋傲臣，高帅，唐丽杰，蒋烨，李一经

（1.东北农业大学动物科学与技术学院，哈尔滨　150030;2.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨　150030）

鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立

刘敏1，杜航1，宋傲臣1，高帅1，唐丽杰2，蒋烨1，李一经2

（1.东北农业大学动物科学与技术学院，哈尔滨150030;2.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030）

为建立快速检测鲑鱼甲病毒（Salmonid alphavirus，SAV）RT-PCR方法，根据GenBank公布的E2基因序列（1 375 bp）设计引物，扩增SAV E2全长基因，利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质（RNA）的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品，以E2F：5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3'，E2R：5'CCTCAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物，优化反应条件，建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明，该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段，引物最适反应浓度为1.0 μmol·L-1，最佳退火温度为57.5℃，对SAV的三种亚型SAV1（V4640）、SAV2（V4619）、SAV5（V4638）检测结果均为阳性，对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性；并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg；以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测，检测结果一致。表明此方法特异性强，敏感性高，稳定性和重复性较好，可用于SAV临床诊断和检测。

鲑鱼甲病毒；SAV E2；核酸物质；RT-PCR；检测方法

网络出版时间2016-7-21 14:09:34[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160721.1409.004.html

刘敏,杜航,宋傲臣,等.鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立[J].东北农业大学学报,2016,47(7):56-62.

Liu Min,Du Hang,Song Aochen,et al.Positive nucleic acid material preparation and establishment of a RT-PCR for salmonid alphavirus[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(7):56-62.(in Chinese with English abstract)

鲑鱼甲病毒（Salmonid alphavirus，SAV）隶属于披膜病毒科（Togaviridae），甲病毒属（Alphavirus）［1］，主要感染大西洋鲑（Salmo salar）和虹鳟（Oncorhynchus mykiss）等鲑科鱼类，引起胰腺、心肌炎症和昏睡等症状，致死率达1%～48%，在鱼类养殖各生长阶段均有爆发［2-3］。目前该病广泛流行于苏格兰、挪威、爱尔兰、法国等欧洲国家［4-6］，2013年鲑鱼甲病毒感染被列入OIE水生动物疫病名录中。……