郑吾星　山东省博兴县畜牧兽医局256500



猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断

郑吾星山东省博兴县畜牧兽医局256500

2015年10月，某猪场发生一起以母猪产死胎、木乃伊胎，以及出生仔猪发热、腹泻、消瘦和最终死亡的病例，通过对病死猪发病前临床症状的观察和病理剖检，结合实验室RT-PCR检测，最终确诊为感染牛病毒性腹泻病毒。

猪；牛病毒性腹泻病毒；分离；鉴定

牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒同属于黄病毒科瘟病毒属成员，两者在抗原性上有部分交叉，在血清学上有交叉反应，易感宿主也有部分交叉。牛病毒性腹泻病毒既可以感染牛，也可以感染猪、羊及野生动物等［1］。猪感染BVDV往往表现出温和猪瘟的症状。

1　材料和方法

（1）主要试剂。病毒基因组RNA提取试剂盒、一步法RT-PCR扩增试剂盒均购自宝生物工程（大连）有限公司；胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自北京百泰克生物科技有限公司。

（2）实验室PCR检测。根据临床症状和病理剖检结果，初步诊断为猪瘟病毒或相关病毒感染，根据参考文献方法，分别合成猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的特异性检测引物。取病死猪的肝脏、脾脏和淋巴结等组织病料，以1∶5的比例加入灭菌生理盐水后充分研磨，12000r/分钟离心5分钟，取上清液按照病毒基因组RNA提取试剂盒使用说明提取组织病料的RNA，参照参考文献中的方法进行RT-PCR扩增，RTPCR扩增产物经2.0％琼脂糖凝胶电泳后观察结果。

（3）基因测序鉴定。将电泳检测大小正确的RTPCR扩增产物利用胶回收试剂盒回收后，送上海生工生物工程有限公司测序，将测序结果与GenBank中的序列进行同源性比较。

2　结果

（1）临床症状。2015年10月，某养殖场母猪产胎中含有死胎和木乃伊胎，仔猪出生后体温升高，被毛凌乱，精神沉郁，食欲下降，先便秘后腹泻，消瘦直至死亡，死亡率不到10％。用青霉素和链霉素等药物治疗无效。用猪瘟活疫苗紧急免疫接种无效。

（2）病理剖检。剖检病死猪可见全身出血，心外膜、肾、淋巴结有多量出血点，淋巴结肿大，消化道有慢性卡他性炎症，胃及肠黏膜发生溃疡。

（3）PCR检测结果。RT-PCR扩增产物经2.0％琼脂糖凝胶电泳，在位于约153bp处可见特异性扩增条带（图1），与文献［3］报道的大小一致，表明待检组织病料中含有牛病毒性腹泻病毒，而无猪瘟病毒。

（4）基因序列鉴定结果。测序结果显示，扩增序列为BVDV特异性序列，证明该发病猪场的致病原为牛病毒性腹泻病毒。

（5）综合诊断结果。经临床症状、病理变化观察等临床诊断，以及PCR检测、基因序列鉴定等实验室诊断，综合判定该猪场发生了牛病毒性腹泻病毒感染。

3　讨论

本研究从临床疑似猪瘟感染病例的仔猪体内检出牛病毒性腹泻病毒，说明牛病毒性腹泻病毒可以感染仔猪，产生类似猪瘟的临床症状和病理特征。近年来，猪感染牛病毒性腹泻病毒的报道不断增多，猪源牛病毒性腹泻病毒的污染问题日益严重，猪群中牛病毒性腹泻病毒的普遍存在常影响猪瘟疫苗的免疫效果。此外，饲喂污染BVDV的饲料也可以成为BVDV的感染来源，一些牛的脏器等废料被加工成饲料，而牛群中BVDV普遍存在，造成了BVDV的污染来源。第三，猪、牛混合饲养，牛感染BVDV后直接传染给猪也是猪源BVDV的感染来源。国内陶洁等于2013年通过对猪瘟疫苗中牛病毒性腹泻病毒的筛查，发现来自10个疫苗厂家的10份猪瘟疫苗样品，有一份检出BVDV阳性核酸片段。通过对BVDV扩增产物测序和序列分析，证实该毒株为BVDV1型，说明猪瘟疫苗中污染的BVDV分离株的遗传特性差异较大。通过各种检测方法的综合运用，可以有效监测猪群BVDV的感染情况。疫苗制备及饲料生产企业要严格对生产原料进行检查，一定要加强对生物制品的安全监测，这样才能有效控制猪源BVDV的污染问题。

［1］李娇，祖立闯，王金良，等.警惕猪群中牛病毒性腹泻病毒感染［J］.养猪，2013，（5）：102-104.