彭其胜 李光谱 孙万春 杨静波 全桂花 刘 宁

摘要干扰素刺激基因15编码蛋白质（Interferon stimulated gene 15 kDa protein， ISG15）是最早被鉴定的类泛素分子蛋白质，在病毒感染和免疫调节等方面具有重要作用。本研究利用免疫沉淀技术将被类泛素ISG15修饰的蛋白富集纯化，采用液相色谱质谱联用技术对流感病毒感染A549宿主细胞过程中产生的类泛素ISG15修饰蛋白进行了分析。实验结果表明，在流感病毒感染的实验组A549细胞中，鉴定到了22种来源于宿主细胞的ISG15修饰的蛋白，包括类泛素蛋白ISG15、细胞周期蛋白T1、热休克蛋白71、钙调素结合蛋白、真核翻译起始因子等，以及1种来源于流感病毒的非结构蛋白NS1。在鉴定的22种宿主蛋白中，有6种蛋白在未感染病毒的对照组A549细胞中也得到鉴定，包括膜联蛋白A1、果糖二磷酸醛缩酶A、线粒体三磷酸腺苷合成酶亚基g、烯醇化酶、肌动蛋白、微管蛋白。生物信息学分析表明，流感病毒感染引起的ISG15修饰的宿主蛋白分别归属于9个不同的蛋白分类，包括细胞骨架蛋白、分子伴侣蛋白、酶调节剂、核酸结合蛋白、激酶类、转移酶类、转录因子、氧化还原酶类以及结构蛋白。本研究为大规模分析鉴定ISG15修饰蛋白提供了一种特异、有效的研究方法。

关键词 流感病毒； 类泛素蛋白； 干扰素刺激基因15编码蛋白质； 液相色谱质谱联用

1引言

流感病毒等微生物在宿主细胞中有效复制和拮抗宿主免疫反应涉及到细胞内的多种重要信号转导通路，如WNT[1]， NFКB[2]， MAPK[3]， PI3K/Akt[4]等，是一个非常复杂的生物学过程。在此过程中，蛋白质翻译后修饰如泛素和类泛素化修饰起到了十分重要的作用。……