章海敏 姜红强 虞效益

摘要 玻璃化冻存是指利用一种或多种高浓度冷冻保护剂（即玻璃化液）保护待冷冻的生物材料，直接投入液氮中进行冻存的方法。近年来，鱼类卵细胞和胚胎的低温和超低温保存研究引起人们重视。本文针对现阶段研究进展及存在的主要问题进行综述，并对鱼卵细胞常用活性检测方法进行汇总。

关键词 鱼卵细胞；玻璃化冻存；影响因子；活性检测

中图分类号 S917.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）06-0240-03

Research Progress and Prospect of Fish Oocytes Vitrification

ZHANG Hai-min 1 JIANG Hong-qiang 2 YU Xiao-yi 3

（1 Zhejiang Agriculture and Forestry University，Lin′an Zhejiang 311300； 2 Zhejiang Medical Instrument Research Institute；

3 Ningbo Institute of Science and Engineering，Zhejiang University）

Abstract Vitrification means pretecting frozen biological meterials by using one or more of high-concentration cryoprotectants，then crypreserve in liquid nitrogen directly. Cryopreservation of oocyte can provide sources of oocytes for the embryo engineering technology，such as external fertilization，nuclear transfer，transgenosis. It is vital to establish seed bank for breeding stocks，rare animals and endangered species，solve fertility problems for infertile women. So research on oocyte cryopreservation is of great signification.In recent years，researchers attact great importance to the studies on low-temperature of fish oocytes and embryos. This article summarized current research progress and existing main problems，and collected the detection method of fish oocyte.

Key words fish oocyte；vitrification；influential factors；detection methods

生物細胞、组织、器官、胚胎甚至个体在超低温（-196 ℃）状态下代谢完全停止，生命因此得以长期保存。慢速冷却法作为传统的低温保存方式，深受冷却速率的影响[1-4]，冷却速率过快或过慢，均会对保存的细胞及组织造成损伤[5]。所谓玻璃化冻存，是生物材料低温冻存中的一种方式，具体指利用一种或多种高浓度冷冻保护剂（即玻璃化液）保护待冷冻的生物材料，直接投入液氮中进行冻存的方法。在此过程中，细胞内的液体转变为非晶体的玻璃态，其内部无晶体或仅少量结晶形成，从而防止冰晶的形成而减小对生物材料的损伤[6]。之后，细胞在一定的复温条件下重新复活，从而达到种质资源保存和应用的目的[7-8]。

1 研究进展

自1985年小鼠胚胎玻璃化冻存获得成功之后[9]，哺乳动物的卵母细胞、精子、胰岛、胚胎神经细胞以及各阶段胚泡等也相继获得成功[10]。但卵细胞因体积较大，结构和组分较复杂，抗冻能力较低，其冷冻保存仍不尽人意[11]。目前仅有一些啮齿类或牛卵细胞，或是卵巢组织冷冻保存成功的报道，但各实验室间的试验结果有很大的差异[12-15]。……