水杨酸法测定蔬菜水果中过氧化氢酶活性
2016-10-17樊航宏薛瑾瑾李志英任光明
樊航宏,薛瑾瑾,李志英,任光明
(忻州师范学院化学系,山西忻州034000)
水杨酸法测定蔬菜水果中过氧化氢酶活性
樊航宏,薛瑾瑾,李志英,任光明
(忻州师范学院化学系,山西忻州034000)
建立一种测定蔬菜水果中过氧化氢酶活性的新方法.在过氧化氢中加入过氧化氢酶分解部分过氧化氢,剩余的过氧化氢在酸性条件下与二价铁离子反应,产生的羟自由基与水杨酸反应生成紫色物质,该紫色物质最大吸收波长为510 nm,通过测定该物质含量来计算过氧化氢酶活性.结果表明:最佳反应条件为1mL pH=1的硫酸、4 mL硫酸亚铁溶液(1×10-3mol/L)、1mL过氧化氢溶液(0.003%)、2 mL水杨酸溶液(1×10-2mol/L),在40℃下反应10 min为最佳反应条件.测定的五种蔬菜水果中过氧化氢酶活性:土豆的过氧化氢酶的活性为4.96(μg/min);黄瓜的过氧化氢酶的活性为1.05(μg/min).
过氧化氢酶活性;过氧化氢;硫酸亚铁;水杨酸
过氧化氢酶(又称触酶),是一类广泛存在于动物、植物和微生物体内的末端氧化酶,其生物学功能是催化细胞内过氧化氢分解为H2O与O2,阻抑H2O2生成有害的·OH[1].其测定方法主要有碘量法[1]、紫外吸收法[2]、荧光分析法[3]、化学发光法[4]、极谱氧电极法[5]、简易气量测定法[6]等,基于过氧化氢易分解,所以直接检测过氧化氢来表示过氧化氢酶活性的测定方法准确度不高.
研究发现Fe2+在酸性条件下与过氧化氢反应会产生羟自由基(·OH),其反应式为:Fe2++H2O2→Fe3++ OH-+·OH,水杨酸与羟自由基反应的紫色产物在波长510 nm下有最大吸收峰[7-9],通过测定双氧水的减少量计算过氧化氢酶反应的过氧化……