洪炜龙，陆 红，吴存造，夏 鹏，陈必成，白永恒（温州医科大学附属第一医院.外科实验室，.医学检验中心，.移植科，浙江温州 5000）

γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号逆转马兜铃酸诱导的肾小管细胞表型转化

洪炜龙1，陆 红2，吴存造3，夏 鹏3，陈必成1，白永恒1
（温州医科大学附属第一医院1.外科实验室，2.医学检验中心，3.移植科，浙江温州 325000）

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸（AA）诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法 将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA 10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10 μmol·L-1组。24 h后，实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1（TGF-β1）、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、骨形态发生蛋白7（Bmp7）和基质成分Ⅰ型胶原a1（Col1a1）和Ⅲ型胶原a1（Col3a1）mRNA的表达；细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果 与正常细胞对照相比，AA处理后，肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1，α-SMA和Col3a1 mRNA表达上调，上皮标志物E-钙黏着蛋白mRNA的表达受到抑制，而且导致了Notch1、Jagged1 mRNA表达的上调和Numb mRNA表达的下调（P＜0.05），提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积，同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后，Notch1（P＜0.01）和Jagged1（P＜0.05）的mRNA表达下调，Numb mRNA表达上调（P＜0.05），说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外，与AA损伤组相比，DAPT也降低了TGF-β1，α-SMA，Col1a1和Col3a1 mRNA表达（P＜0.05），提高BMP-7和E-钙黏着蛋白mRNA表达（P＜0.05），提示DAPT抑制了AA诱导的上皮细胞的表型转化与基质累积。结论 DAPT抑制AA诱导的肾小管上皮细胞的表型转化与基质累积，其可能机制是DAPT靶向干预Notch信号的活化。

DAPT；马兜铃酸；表型转化；基质累积；Notch信号

DOl:10.3867/j.issn.1000-3002.2016.03.005

Notch信号通路进化中高度保守，其调控细胞增殖、分化和凋亡的功能几乎涉及所有组织和器官。……