葸玉琴,赵运旺,马梅兰,曾家豫,廖世奇

(1.西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州　730070；2.甘肃省医学科学研究院医学分子生物学研究中心，甘肃兰州　730050)



琼脂磁珠消减SELEX技术筛选HIV P24抗原适配体

葸玉琴1,赵运旺1,马梅兰1,曾家豫1,廖世奇2*

(1.西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州730070；2.甘肃省医学科学研究院医学分子生物学研究中心，甘肃兰州730050)

建立以羧基化琼脂磁珠为筛选介质，快速筛选高特异性、高亲和力的HIV P24抗原适配体的方法.利用消减SELEX技术及靶标替换的方法，以HIV P24抗原作为靶分子，羧基化琼脂磁珠为载体，进行6轮筛选，筛选到3条特异性核酸适配体.特异性检测表明，筛选得到的HIV P24抗原适配体与HIV P24抗原的结合解离常数均在纳摩尔级水平.该方法为HIV早期检测提供了新的检测技术，对适配体与靶分子相互作用机理的研究具有重要价值.

HIV P24抗原；消减SELEX技术；DNA适配体；靶标替换

P24抗原是HIV-1的核心抗原，机体感染HIV-1后，P24在血清中出现的时间较早，一般在HIV-1感染后2～3周就可以检测，可作为艾滋病窗口期检测的血清标志物，通过检测血液中的P24，可达到早期诊断和治疗的目的[1].DNA适配体相比于抗体检测具有许多优点：① DNA适配体更稳定，不易降解，可长期保存[2-3]；② 筛选周期一般1～2个月[4-5]；③ 无免疫原性[6-7]；④ 变性、复性速度较快，可反复使用[8]，可在室温下运输、保存；⑤ 易于化学修饰[9].本文利用靶标替换消减SELEX技术通过6轮筛选快速得到HIV P24抗原适配体,筛选周期为10～15 d,明显地缩短了筛选周期,提高了筛选效率.

1　材料与方法

1.1实……