高 寒，夏 斌，费小雯，李亚军，邓晓东，余丽芸（.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江 大庆 69；.中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南 海口 570；.海南医学院理学院，海南 海口 570）

莱茵衣藻CrPGP3和CrFAT1基因克隆及其序列分析与原核表达

高 寒1，2，夏 斌2，费小雯3，李亚军2，邓晓东2，余丽芸1
（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江 大庆 163319；2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南 海口 571101；3.海南医学院理学院，海南 海口 571101）

克隆莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）的CrPGP3和CrFAT1基因，并对其序列进行生物信息学分析和原核表达。选取莱茵衣藻CC124提取总RNA后，反转录cDNA，PCR获得CrPGP3和CrFAT1的全长编码区，构建原核表达载体CrPGP3-PGEX-6p-1和CrFAT1-PGEX-6p-1，转入大肠杆菌DL21 （DE3）中，在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导整合蛋白表达。结果表明， CrPGP3和CrFAT1的全长编码区分别为786 bp和1 188 bp，分别编码261和395个氨基酸；CrPGP3是与脂类合成相关磷脂酰甘油磷酸合成酶（Phosphatidylglycerophosphate synthase）属于CDP-alcohol phosphatidyltransferase家族，CrFAT1是酰基载体蛋白硫脂酶（Acyl-ACP thioesterase）属于hot dog家族；SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。本文成功克隆了CrPGP3和CrFAT1基因的全长编码区，并在原核生物中表达得到了预期蛋白。

CrPGP3；CrFAT1；莱茵衣藻；基因克隆；原核表达

高寒，夏斌，费小雯，等. 莱茵衣藻CrPGP3和CrFAT1基因克隆及其序列分析与原核表达［J］.广东农业科学，2016，43 （8）：163-168.

莱茵衣藻是一类利用光合作用的自养生物，具有陆地、海洋分布广泛，营养丰富、生长周期短、生物产量高、环境适应能力强等优点，是开发新生物质能源的理想材料［1-2］。光合作用对于藻的生长至关重要，也决定着藻类代谢产物的积累，磷脂酰甘油（Phosphatidylglycerol，PG）是植物在叶绿……