吕玉伟,吕亚维,杨泽熵,王睿劼,张雨靖,王英娟

(西北大学 生命科学学院/西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室/生物技术省级重点实验室, 陕西 西安　710069)



·生命科学·

贻贝蛋白Mgfp-5的原核表达与纯化

吕玉伟,吕亚维,杨泽熵,王睿劼,张雨靖,王英娟

(西北大学 生命科学学院/西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室/生物技术省级重点实验室, 陕西 西安710069)

贻贝(Mytilus galloprovincialis) 足丝中黏附蛋白，是一种黏合强度高、生物相容性好、优质的生物黏合剂,可以应用于医学、表面化学、海洋工程等领域,其中富含DOPA(多巴,3,4-二羟基苯丙氨酸)的贻贝足丝蛋白5(Mytilus galloprovincialis foot protein type 5, Mgfp-5)显著表现出此特性。天然获取Mgfp-5含量低,易固化,纯化困难,越来越多学者尝试基因工程获得黏蛋白。文中构建重组质粒pET28a-mgfp,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白Mgfp-5。为得到高质量的Mgfp-5蛋白,优化了Mgfp-5蛋白诱导表达参数:菌液OD600=0.8,诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷(IPTG)0.8 mmol/L,37℃,诱导8h;优化镍离子亲和层析纯化蛋白Mgfp-5最佳条件为:Elution Buffer的pH为7.0,500 mmol/L咪唑。Western Blot鉴定到重组Mgfp-5可以特异性表达。该研究为得到大量Mgfp-5蛋白奠定了基础,为加速黏蛋白的黏附机理及生物医学黏合剂的开发提供参考。

贻贝;mgfp-5基因;原核表达;优化;纯化

双壳类软体动物贻贝(Mytilusgalloprovincialis)足腺分泌的黏性蛋白质,亦称贻贝黏蛋白、多酚蛋白质或贻贝足丝蛋白(Mytilusgalloprovincialisfoot protein,Mgfp)[1-3],富含酪氨酸经羟基化修饰后的DOPA(多巴,3,4-二羟基苯丙氨酸)残基[4-6]。DOPA残基强的金属螯合能力和强氢键的能力,利于Mgfp在任何环境尤其在潮湿性环境中,牢固黏附于不同材料表面[7-8]。……