王琼　史冬梅　刘维达

(1.中国医学科学院皮肤病研究所，南京 210042;2.济宁市第一人民医院皮肤科，济宁 272011)



·论著·

小鼠骨髓树突状细胞对白念珠菌吞噬、杀伤作用的研究

王琼1史冬梅2刘维达1

(1.中国医学科学院皮肤病研究所，南京 210042;2.济宁市第一人民医院皮肤科，济宁 272011)

目的体外分离培养小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic Cell，DC)并与白念珠菌共同孵育，研究不同浓度的DC对白念珠菌的吞噬、杀伤作用，并研究随着共孵育时间的延长DC表型的变化及其吞噬、杀伤白念珠菌能力的变化。方法无菌条件下分离培养C57小鼠骨髓DC；倒置显微镜下观察DC的形态；Cellometer Mini细胞计数仪测定DC生长曲线及细胞直径变化；流式细胞仪检测DC及白念珠菌刺激后DC表面标志物CD11c及其表面分子MHCⅡ、CD40、CD80及CD86的表达；光学显微镜、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪测定DC对白念珠菌的吞噬及杀伤作用。结果体外培养10 d小鼠骨髓DC，倒置显微镜观察可见典型DC形态；随着培养时间的延长，细胞逐渐增大，培养第10天时，细胞直径分布最多的为10.2 μm；生长曲线显示，DC呈倍数增长，第2～9天为细胞对数生长期，第9天左右增殖曲线达到顶峰。培养第10天，未经白念珠菌刺激的DC表面CD11c分子及CD80分子高水平表达，CD40、CD86及MHCⅡ低表达；经白念珠菌刺激后，DC表面CD11c分子、CD80、CD40、CD86及MHCⅡ均高表达，呈成熟DC表型。激光共聚焦(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM)及流式细胞仪(Flow Cytometer，FCM)检测DC对白念珠菌吞噬作用，当DC与白念珠菌的比例为1∶1时，随着共培养时间的延长(30 min～1.5 h)，吞噬率无明显变化(P=0.063)；当DC与白念珠菌比例为2∶1、1∶2及1∶4，随着DC细胞所占比例的减小，DC细胞吞噬作用增强，当比例为1∶4时，DC吞噬作用最强，且随着共培养时间的延长(30 min～1.5 h)，吞噬率也明显上升，差异有统计学意义(P=0.003；……