孟 琼，孔 宁，单同领，吴永光，左叶雯，童 武，郑 浩，李国新，于 海，童光志，徐永杰

（1. 信阳师范学院，信阳 464000；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

·研究论文·

猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

孟 琼1，2，孔 宁2，单同领2，吴永光2，左叶雯2，童 武2，郑 浩2，李国新2，于 海2，童光志2，徐永杰1

（1. 信阳师范学院，信阳 464000；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

本研究获得5个猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）S1基因截短基因，原核表达后制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、Western blot 和间接免疫荧光检测（indirect immunofl uorescence assay，IFA）显示，仅有SE蛋白诱导的多克隆抗体具有免疫活性。因此以SE蛋白为抗原建立间接ELISA抗体检测方法，优化各反应参数并确定临界值为0.155。经特异性和符合性分析，该ELISA检测方法具有PEDV特异性，符合率为93.7%。批内、批间重复率变异系数均小于10%，表明建立的iELISA方法重复性良好。抗S蛋白的ELISA检测方法的建立为PEDV血清学抗体检测和疫苗评估奠定了基础。

间接ELISA；猪流行性腹泻病毒；截短S蛋白

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）感染引起的一种急性、高度接触性肠道传染病，以呕吐、水样腹泻、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征［1］。自2010年以来，PED以仔猪高病发率和死亡率给中国养猪业造成严重经济损失，是当前仔猪腹泻死亡的重要病因之一［2］。因此，PEDV诊断技术的研究具有重要的意义。

PEDV为冠状病毒科（Coronaviridae）、冠状病毒属（Coronavirus）中 I 群成员［3］。S蛋白是冠状病毒属成员最重要的一个表面囊膜糖蛋白，形成病毒粒子表面特征性的冠状结构。比较S蛋白S1和S2亚基之间GxCx及保守九聚体同源性，S蛋白被划分为S1（第1～789位氨基酸）和S2（第790～1383位氨基酸）两个功能区［4］，其中S1区包含多个病毒主要中和表位和受体结合域［5］。……