王晓星，崔艳艳，菅复春，张忠义，宁建峰，张龙现，王荣军，宁长申

(1. 河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 450002； 2.宜阳县动物疫病预防控制中心，河南 宜阳 471600)

羊附红细胞体巢式PCR检测方法的建立与应用

王晓星1，崔艳艳1，菅复春1，张忠义2，宁建峰2，张龙现1，王荣军1，宁长申1

(1. 河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 450002； 2.宜阳县动物疫病预防控制中心，河南 宜阳 471600)

为了建立一种更加准确、敏感的羊附红细胞体检测方法，根据GenBank上发表的羊附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号：AF338268)，设计内、外2对特异性引物，建立了巢式PCR检测方法。筛选该方法的最佳反应条件，并进行了特异性、敏感性、重复性试验及临床样本检测。结果表明，该方法能扩增出大小为506 bp的羊附红细胞体特异性片段，与GenBank收录的相关参考序列同源性为97.8%～99.6%；与猪附红细胞体、嗜吞噬细胞无浆体、绵羊无浆体、莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫基因组DNA均无交叉反应；DNA最低检测量为0.654 fg·μL-1；具有良好的重复性；对77份羊临床血液样品检测结果表明，羊附红细胞体感染率为71.43%，高于常规PCR和已报道的巢式PCR检测结果。

羊附红细胞体; 16S rRNA; 巢式PCR

附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由附红细胞体(HemotropicMycoplasma)寄生在多种动物及人的红细胞表面、血浆及骨髓内的一种人畜共患病，该病的主要临床表现为红细胞压积降低、血红蛋白浓度下降、白细胞增多、贫血、黄疸、发热等[1-3]。1934年，NEITZ等在绵羊的红细胞及周围发现有多形态的微生物寄生，命名为绵羊附红细胞体(Eperythrozoonovis)。根据其形态和生物学特性，最初把附红细胞体归类为立克次氏体类微生物(Rickettsiales)。……