陆星星，刘伟阳，徐后娟*

1.玉溪农业职业技术学院，云南玉溪6531002.山东农业大学植物保护学院，山东泰安271018

烟草三类根腐类病害病原真菌多重PCR检测方法的建立

陆星星1，刘伟阳2，徐后娟2*

1.玉溪农业职业技术学院，云南玉溪653100
2.山东农业大学植物保护学院，山东泰安271018

本文分别设计和验证了烟草黑胫病菌和根黑腐病菌的特异性检测引物，结合镰刀菌属通用引物，进行了烟草三类根腐类病致病菌-烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和镰刀菌的多重PCR检测，并对影响多重PCR的退火温度、引物用量、dNTP用量、模板用量分别进行了分析。结果显示，退火温度在43～61℃范围内，烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和镰刀菌的引物用量在0.2：0.32～0.48：0.2μmol·L-1，dNTP用量在0.1～0.2mmol·L-1μL/25μL反应体系中，可以经济且高效的实现对烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和镰刀菌的特异性同步检测。

烟草；根腐类病害；多重PCR；同步检测

烟草是一种重要的经济作物，田间易受到多种病虫害的威胁，其中根腐类病害危害较为严重，成为制约其优质适产的重要因子［1］。引起烟草根部腐烂的病原种类较多，其中寄生疫霉烟草致病变种（Phytophthora parasitica var.nicotianae）、镰刀菌（Fusarium spp.）和基生根串珠霉（Thielaviopsis basicola）为三类重要的烟草根腐类真菌病原，三者均能危害包括烤烟、晾烟、晒烟、香料烟、白肋烟等所有栽培烟草，可在烟草的任何生育阶段侵染为害，以大田期为主，导致烟叶产量和质量下降，烟农经济利益受损［2-4］。

尽管三种病原引起的病害种类不同，寄生疫霉菌危害烟草形成黑胫病（Tobacco black shank），镰刀菌类危害病害统称……