于黎明，陈　姝，何　松△

(重庆医科大学附属第二医院:1.消化内科;2.血液科　400010)



·技术与方法·

具有双向分化潜能的鼠胎肝干细胞的分离、培养及鉴定*

于黎明1，陈姝2，何松1△

(重庆医科大学附属第二医院:1.消化内科;2.血液科400010)

目的优化体外分离、培养和筛选胎鼠肝脏干细胞(LSC)的方法，并鉴定其双向分化的潜能。方法通过密度梯度离心和细胞差异性贴壁法分离小鼠胎肝干细胞(FLSC)，以细胞平板克隆技术和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定FLSC的增殖，通过添加二甲基亚砜(DMSO)和HGF等诱导干细胞分化。结果分离后的FLSC 24 h内贴壁，卵圆形，排列紧密，1～2周内活化， CD133、CD49f、EPCAM的阳性率分别为(97.95±1.21)%、 (92.71±3.49)%、和(50.73±3.45)%，表达甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)；诱导分化后糖原染色(PAS)法染色可见红色糖原颗粒，表达清蛋白(ALB)、肝细胞核因子4α(HNF-4α)。结论联合密度梯度离心和差异性贴壁法成功分离FLSC，分离后的FLSC干性强，增殖能力强，具有向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的能力。

胚胎肝干细胞;离心法,梯密度;细胞,培养的;细胞分化

ofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400010,China)

肝脏干细胞(liver stem cell,LSC)是具有自我增殖和多向分化潜能的细胞，在适当条件下可以向肝细胞、胆管上皮细胞、胰腺细胞[1]、神经细胞等细胞进行分化。目前LSC的来源主要有成体肝脏和胎肝。由于成体肝脏中干细胞数量极少，占肝脏中总细胞数约为0.5%～1.5%[2-3]，通过DDC(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydro-collidine)处理构建肝损伤模型[4]可提高LSC含量;有报道[5]指出孕8.5～14.5 d胎肝中LSC的含量可达2%～5%，且细胞的活性高，便于实验的开展。本实验旨在采用简化的密度梯度离心法联合细胞差异性贴壁法[6]筛选并培养胎肝干细胞(fetal liver stem cells,FLSC)，并验证其具有向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的潜能。……