路艳芳，　刘为勇，　乔　龙，　汪　峰，　侯红艳，　孙自镛△

华中科技大学同济医学院附属同济医院 1检验科 2肿瘤生物医学中心，武汉　430030



用酵母双杂交筛选与HIV Tat相互作用的宿主因子*

路艳芳1，刘为勇1，乔龙2，汪峰1，侯红艳1，孙自镛1△

华中科技大学同济医学院附属同济医院1检验科2肿瘤生物医学中心，武汉430030

目的通过酵母双杂交试验筛选与HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法对构建的pGBKT7-tat进行自激活和半乳糖苷试验。运用酵母双杂交实验以HIV Tat作为诱饵，与人均一化基因库进行初筛。对筛选出来的阳性克隆进行测序分析。结果构建的pGBKT7-tat无自激活特性和细胞毒性，然后进行酵母双杂交试验。结果发现在DDO/X/A平板上出现47个阳性的蓝色斑点，在QDO/X/A平板上进行进一步筛选，对再次出现的8个蓝色斑点进行测序。在GenBank中对相互作用的人体基因进行BLAST分析，根据基因注释推测其在病毒与机体相互作用过程中可能发挥的作用。结果测出5个不同的基因，这5个不同的基因分别为羧肽酶N、酪氨酸磷酸酶受体M、ATP1B1、锌指蛋白MYM2和锌指蛋白MYM5。结论本研究新筛选出羧肽酶、酪氨酸磷酸酶受体和ATP1B1病程相关蛋白及两个锌指蛋白等5种功能蛋白与HIV Tat相互作用，为进一步研究HIV Tat蛋白功能提供依据。

酵母双杂交；HIV Tat；蛋白质相互作用；天然免疫；病毒复制

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)是艾滋病的主要病原体。自从1981年发现以来，目前已经成为危害人类生命健康的重大传染性疾病。HIV Tat是一个14 kD的蛋白质。它是一个重要的HIV毒力因子，在病毒基因的表达、复制、播散和疾病的进程中发挥重要作用。……