蒋　鸣，　翟祥军，　徐　池，　周国仁

1 江苏省肿瘤医院放疗科，南京　2100092江苏省疾病预防与控制中心，南京　210009



TRAF4沉默对食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及细胞周期的影响

蒋鸣1，翟祥军2，徐池1，周国仁1

1江苏省肿瘤医院放疗科，南京2100092江苏省疾病预防与控制中心，南京210009

目的探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)基因表达对人食管癌细胞恶性行为的影响。方法选取对数生长期Eca-109细胞并行脂质体法高效转染2条靶向沉默TRAF4的siRNA(siTRAF4-1、siTRAF4-2)，采用实时定量PCR检测转染后的TRAF4 mRNA水平以筛选沉默效果较好的siRNA为沉默组，同时设阴性对照组(转染阴性siRNA序列)和空白对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测转染24、48、72、96 h的吸光度值以计算各组增殖抑制率，Annexin Ⅴ-FITC/PI双染、Caspase-3 FITC单染或PI单染流式细胞术检测转染后的凋亡率、Caspase-3活化率和细胞周期分布情况。结果靶向沉默TRAF4 24～96 h内，转染siTRAF4-1、siTRAF4-2的Eca-109细胞中TRAF4 mRNA水平均低于未转染或转染对照siRNA的细胞，且转染siTRAF4-1、siTRAF4-2后的沉默率均高于转染对照siRNA的细胞(均P<0.05)；后续试验选取沉默率较高的siTRAF4-1进行研究。与空白对照组和阴性对照组相比，沉默组的增殖抑制率、凋亡率及Caspase-3活化率均升高，差异有统计学意义(均P<0.05)；沉默组转染96 h的G0/G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组，而S、G2/M期细胞比例低于其余两组，以上差异均有统计学意义(均P<0.05)；空白对照组和阴性对照组以上指标的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论通过siRNA靶向沉默TRAF4基因表达的效果较好，可抑制细胞增殖并诱导凋亡、Caspase-3活化和细胞周期G0/G1期阻滞，为食管癌靶向治疗提供了方法学基础。

小干扰RNA；肿瘤坏死因子受体相关因子4；食管癌细胞Eca-109；增殖；凋亡

食管癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，在我国属于高发肿瘤之一，尽管目前在食管癌诊断、治疗上有较大发展，但预后仍不尽人意[1]。恶性肿瘤发生发展过程中涉及多个基因的异常表达，故探讨影响食管癌恶性行为的关键基因成为靶向治疗的重点[2]。肿瘤坏死因……