卢伟昌，谢柱彬，殷进方，卢小明，张险朋（.东莞市东坑镇农业技术服务中心，广东 东莞 53450；.东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 53086）

对东莞市家禽H5亚型禽流感免疫效果的评价

卢伟昌1，谢柱彬1，殷进方2，卢小明1，张险朋2
（1.东莞市东坑镇农业技术服务中心，广东 东莞 523450；2.东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

为了评估东莞市家禽H5亚型禽流感的免疫效果，2015年在东莞市15个规模家禽养殖场和2个镇的散养家禽场点共采集了1223份禽血清，采用血凝与血凝抑制试验方法进行检测。结果为东莞市家禽H5亚型禽流感抗体阳性数为1071份，阳性率为87.57%，其中鸡的抗体阳性率为90.79%，鸭的抗体阳性率为83.23%，鹅的抗体阳性率为72.22%，鸽子的抗体阳性率为57.58%；规模场家禽抗体阳性率为92.05%，散养家禽抗体阳性率为70.47%。结果表明东莞市家禽的抗体水平总体比较高，但抗体水平参差不齐，存在H5亚型高致病性禽流感感染的风险。

H5亚型禽流感；家禽；血凝与血凝抑制试验；免疫效果

禽流感（avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种人兽共患传染病，主要感染鸡、鸭、鹅、鸽子等禽类。禽流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒，根据血凝素（H）和神经氨酸酶（N）的抗原性不同，将AIV进行分类。目前，已从水禽中分离到了16 种HA与9种NA亚型的A型流感病毒。家禽感染AIV后，表现为高致病力，中度致病力，低致病力和无致病力，H5亚型和H7亚型认为是可以引起是高致病性禽流感的亚型。OIE将禽流感列为应报告动物传染病，我国将高致病性禽流感列为一类传染病。H5N1禽流感病毒不仅对家禽业造成重大经济损失，并可直接感染人，甚至导致患者死亡，对公共卫生安全造成极大威胁。我国将H5亚型高致病性禽流感列为强制免疫的疫病之一，采取疫苗免疫和扑杀相结合的综合策略。为了评估我市家禽H5亚型禽流感的免疫效果，为防控高致病性禽流感提供准确的数据，在2015年采集了15个规模养殖场和散养的家禽的血清进行H5亚型禽流感抗体检测，现报告如下。

1　材料与方法

1.1家禽血清

共1223份禽血清，2015年采自东莞市15个规模家禽养殖场和东坑镇、虎门镇的散养家禽，其中鸡血清945份，鸭血清155份、鹅血清90份，鸽血清33份。以翅静脉采血，以3500r/min离心15min分离获得待检血清，-20℃保存备检。

1.2试剂

1.2.11%鸡红细胞悬液

采集实验室饲养的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS液配成体积分数1%鸡红细胞悬，4℃保存备用。

1.2.2H5亚型禽流感抗原（Re-6）和阳性血清H5亚型禽流感抗原（Re-6）和阳性血清，购自哈尔滨维科生物科技有限公司，批号分别为2013004，2013001。

1.2.3主要耗材和仪器96孔“V”型反应板，离心机，8道移液器，微量震荡器。

1.3方法

按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）规定的血凝与血凝抑制方法操作。以完全抑制4U抗原的血清最高稀释倍数作为HI的滴度。HI效价小于或等于3log2判阴性，HI效价等于4log2为可疑，进行重复试验，HI效价大于或等于5log2判阳性，判定为抗体合格。根据东莞市动物疫病监测方案规定，家禽免疫后21d进行免疫效果监测，HI试验免疫抗体大于或等于5log2的样品判为免疫抗体合格。

2　结　果

2.1不同时间家禽免疫抗体合格率比较

2015年共检测家禽血清1223份，H5亚型禽流感抗体阳性1071份，抗体阳性率为87.57%，其中第一季度抗体阳性率为90.00%，第二季度抗体阳性率为73.26%，第三季度抗体阳性率为94.20%，第四季度抗体阳性率为90.59%，详细结果见表1。

表1　不同季节家禽H5亚型禽流感抗体免疫情况

2.2不同养殖场所家禽免疫抗体合格率比较

在检测1223份家禽血清中，其中检测散养家禽血清254份，H5亚型禽流感抗体阳性179份，抗体阳性率为70.47%；检测规模养殖场家禽血清969份，H5亚型禽流感抗体阳性892份，抗体阳性率为92.05%，详细结果见表2。

表2　不同养殖场点家禽H5亚型禽流感抗体免疫情况

2.3不同家禽种类免疫抗体合格率比较

在检测1223份家禽血清中，检测鸡血清945份，H5亚型禽流感抗体阳性858份，抗体阳性率为90.79%；检测鸭血清155份，H5亚型禽流感抗体阳性129份，抗体阳性率为83.23%；检测鹅血清90份，H5亚型禽流感抗体阳性65份，抗体阳性率为72.22%；检测鸽子血清33份，H5亚型禽流感抗体阳性19份，抗体阳性率为57.58%，详细结果见表3。

3　讨论

3.1使用灭活疫苗是防控高致病性禽流感的最有效措施，东莞市的家禽养殖以小规模场和散养为主，家禽的存栏量比较少，多年来一直按照农业部的部署落实高致病性禽流感的强制免疫。从本次家禽H5亚型禽流感抗体血清学调查可以看出，我市的家禽H5亚型禽流感抗体水平较高，达到了87.57%，远高于农业部规定的免疫合格率大于等于70%的要求。近年来，随着我市加强动物防疫队伍建设，建立了市、镇、村动物防疫队伍，落实动物防疫责任制，严格执行“政府保密度，业务部门保质量”的政策，采用“动物防疫管理信息系统”动态监控养殖场的免疫情况，养殖场实行二次免疫制度，散养户实行春、秋、冬大防集中免疫，常年补免，做到村不漏户，户不漏针，构筑了高致病性禽流感的免疫屏障。

表3　不同家禽种类点家禽H5亚型禽流感抗体免疫情况

3.2从监测的场点来看，规模场的H5亚型禽流感的抗体阳性率明显高于散养户。规模养殖场严格实行二次免疫甚至三次免疫，家禽抗体处于较高的抗体水平。散养户由于分布广，防疫意识较差，通常只在集中免疫时免疫一次，抗体水平偏低，不足于抵抗野的侵袭，给动物疫病防控工作带来很大难度，疫情风险比较大，是防疫监测的重点对象。

3.3从不同时间的监测结果来看，以第三季度的抗体阳性率最高，依次为第四季度、第一季度、第二季度，第二季度最低只有73.26%。可能是第二季度，天气比较炎热，养殖户产生麻痹心理，以为气温高，不会发生疫情，放松了免疫措施的落实。

3.4从不同种类家禽监测结果来看，鸡的H5亚型禽流感抗体阳性率最高达到90.79%，依次为鸭、鹅、鸽子，抗体阳性率分别为83.23%、72.22%、57.58%，鸽子的抗体阳性率最低。陈华等对2009～2013年山东家禽H5亚型禽流感抗体监测结果也表明，鸡的抗体阳性率明显高于水禽。目前，我市使用的禽流感疫苗分为鸡的疫苗和水禽专用苗。免疫的效果不同可能与不同种类的家禽对禽流感的疫苗免疫应答不同。水禽养殖的规模化程度不高，放牧或半放牧的饲养方式，免疫难度大，免疫效果难以保证。根据调查鸽子进行灭活禽流感免疫后，会影响产蛋，种鸽场的养殖户不愿意免疫，可能是造成鸽子抗体水平比较低的原因。

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［3］张秀美，等.关注禽流感病毒的变异及其公共卫生学意义［J］.山东畜牧兽医，2008，29，（7）：1-4.

［4］陈华，等.2009-2013年山东省H5亚型禽流感抗体检测［J］.山东畜牧兽医，2014，35，（9）：3-5.

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.027

卢伟昌（1976～），广东省东莞市人，助理兽医师，从事动物疫病防控工作