范桂强，王志杰，李桐，齐善厚，庞红霞，孙金旭，刘佳（.河北省衡水市食品药品检验检测中心，河北 衡水05000；.衡水学院，河北 衡水05000；.衡水科技工作者服务中心，河北 衡水05000）

HPLC法测定红景天苷研究

范桂强1，王志杰2，李桐3，齐善厚2，庞红霞1，孙金旭2，刘佳2
（1.河北省衡水市食品药品检验检测中心，河北 衡水053000；2.衡水学院，河北 衡水053000；3.衡水科技工作者服务中心，河北 衡水053000）

利用HPLC法测定红景天中红景天苷含量，经试验验证，此方法测定红景天苷含量重复性试验最大标准偏差为0.27%，峰面积与红景天苷标准品线性关系良好，标准曲线方程为Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），线性范围1 mg/mL～100 mg/mL，加样回收率98.39%～101.15%间，经测定红景天中红景天苷含量为3.14g/100g。

HPLC；红景天；红景天苷

红景天又名高山红景天（Rhodiola sachalinensis A Bor.），为药食两用植物［1］。近年来，对红景天的研究较多，经研究发现红景天具有抗辐射、抗疲劳、抗衰老等药理作用［2］。红景天较强的药理功效与红景天中活性成分密切相关，经研究证实红景天苷为红景天中具有明显功效的成分之一已经被较为深入的分析研究［3-4］，而对于红景天中红景天含量测定方法及准确性研究较少，本研究建立了HPLC法测定红景天苷含量的测定方法，以期为红景天品质及红景天苷含量的测定提供参考。

1　材料与方法

1.1材料

红景天苷标准品（来源：中国食品药品检定研究院，批号：110818-201206）；高山红景天药材：购于吉林省安图县二道白河镇。

1.2主要仪器

Agilent1100高效液相色谱仪：美国；BSM电子分析天平：上海田宫称重制造有限公司；UV-2501分光光度计：日本岛津。

1.3方法

1.3.1色谱测定条件

流动相：甲醇-水，比例8∶2，流动相流速0.2 mL/ min，柱温度25℃；进样量10 μL，利用外标法进行定量分析，检测波长276 nm，色谱柱为不锈钢柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）

1.3.2红景天苷标准品处理方法

准确称取红景天苷标准品0.050 12 g，置于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，以此为母液，分别配置不同浓度红景天苷标准品溶液。

1.3.3红景天样品处理方法

精确称量1 g红景天于500 mL具塞三角瓶中，添加20 mL甲醇溶液，闪式提取40 s，待静置后取上清液，0.45 μm滤膜过滤待用。

1.3.4回收率计算

回收率计算公式如下：

式中：A为回收率，%；W为原红景天中红景天苷含量，mg；Z为加标量，mg；E为加标后测定混合液中红景天苷含量，mg。

1.3.5红景天苷含量计算红景天苷含量计算公式：N=G×V/1 000×100/M

式中：N为红景天中含有的红景天苷含量，g/100 g；G为提取红景天苷浓度，mg/mL；V为提取液体积mL；M为红景天用量，g。

2　结果与讨论

2.1测定波长的确定

为确定红景天中红景天苷高效液相色谱的测定波长值，以购买的红景天苷标准品为测定的样品，用紫外分光光度计测定波长值，波长扫描范围200 nm～500 nm，经扫描后结果如图1所示。

图1　红景天苷标准品全波长扫描结果Fig.1　The full wavelengh scanner result for salidroside

由图1分析可知，经紫外分光光度计全波长扫描后，红景天苷标准品于276 nm处有一最大吸收峰，表明红景天苷在此波长下吸收值最大，因此确定276 nm为红景天苷的紫外吸收测定波长。

2.2标准品液相色谱图

红景天苷标准品经甲醇处理后，HPLC法测定［5］，测定条件如下：流动相：甲醇-水，比例8∶2，流动相流速0.2 mL/min，柱温度25℃；进样量10 uL，利用外标法进行定量分析，检测波长276 nm，色谱柱为不锈钢柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）。经测定后，红景天苷标准品HPLC液相色谱图如图2所示。

由图2分析可知，经HPLC法测定，红景天苷标准品在色谱图中5.13 min时，出现最大、唯一吸收峰，表明此出峰时间点为红景天苷标准品在此HPLC条件下的检测点，红景天中红景天苷含量HPLC法测定可以以此点作为检测点。

图2 红景天苷标准品液相色谱图Fig.2　The HPLC spectra for salidroside standard

2.3标准曲线制备及线性范围考察

以1.3.2项下母液，用甲醇为溶剂分别配制不同浓度红景天苷标准品溶液（浓度分别为0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 μg/mL），在上述条件下分别进行HPLC测定，以红景天苷标准品浓度为横坐标，红景天苷吸收峰面积为纵坐标，进行回归测定，测定结果如图3所示。

图3　红景天苷标准品浓度与峰面积线性关系图Fig.3　The linear relationship between content of salidroside and peak area

由图3分析可知，红景天苷标准品浓度和峰面积呈现一定的线性关系，线性回归方程为Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），该回归方程在1 mg/mL～100 mg/ mL的范围内呈现良好的线性范围。

2.4重复性试验

精确称取经处理后的红景天苷标准品同一份，将此同一份均匀5份平分，根据测定条件测定红景天苷标准品含量，计算5份测定后的平均值及RSD，结果如表1所示。

由表1分析可知，经处理后的源于同一样品的5份红景天苷样品分别进样后，测定样品平均含量1.569 6 mg/mL，经计算后RSD值为0.27%，达到了该方法重复性测定的要求，可以作为分析红景天苷含量的测试方法使用。

表1重复性试验Table 1　Result of repetitive test

2.5回收率试验

加样回收率是分析试验测定方法是否可行的另一项检测指标，经处理后的红景天样品，平均成3份，按HPLC测定要求，处理样品后，分别测定其红景天苷含量，红景天苷标准品配制成不同浓度后，分别添加至红景天样品中，处理后再次测定红景天苷含量，分别计算回收率和RSD值，用于评估该HPLC法测定红景天苷含量的可行性，结果如表2所示。

表2回收率试验Table 2　Recovery rates

由表2分析可知，红景天中红景天苷含量测定经加标后，红景天苷回收率在98.39%～101.15%间，红景天苷的平均回收率为99.53%，回收RSD值为1.45%，在允许范围之内，表明回收良好，此HPLC法测定红景天中红景天苷含量误差较小，误差在可控范围之内。

2.6红景天中红景天苷含量测定

根据设定HPLC法测定条件，红景天经处理后测定红景天苷含量，结果如图4所示。

由图4分析可知，在经试验验证的HPLC法测定条件下，对经处理后的红景天进样测定，红景天中的成分峰与其他杂质峰之间分离度较好，和红景天苷相对应时间点有相应单一峰出现，表明该方法能够较好的测定红景天中红景天苷含量，干扰较少，该HPLC条件较适宜于红景天中红景天苷含量的测定分析，经对比、计算红景天中红景天苷含量为3.14 g/100 g。

图4 红景天测定图谱Fig.4 The HPLC spectra for rhodiola

3　结论

红景天为药食两用的植物，经研究发现其具有有抗辐射、抗疲劳、抗衰老等药理作用。红景天较强的药理功效与红景天中活性成分密切相关，经研究证实红景天苷为红景天中具有明显功效的成分之一，利用HPLC法测定红景天中红景天苷含量，测定条件为流动相：甲醇-水，比例8∶2，流动相流速0.2 mL/min，柱温度25℃；进样量10 μL，利用外标法进行定量分析，检测波长276 nm，色谱柱为不锈钢柱ZORBAX SB-C18 （150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm），经试验验证，此方法测定红景天苷含量重复性试验最大标准偏差为0.27%，峰面积与红景天苷标准品线性关系良好，标准曲线方程为Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），加样回收率98.39%～101.15%间，经测定红景天中红景天苷含量为3.14 g/100 g。

［1］邹晓丽．长白山红景天配伍FDP抗疲劳作用实验研究［D］．哈尔滨：东北师范大学，2008：78-85

［2］陶贵荣，赵银萍，齐建，等．不同地区红景天植物红景天苷含量比较研究［J］．西北植物学报，2010，30（9）：1902-1905

［3］李颖，厍守权，刘刚，等．发酵红景天中红景天苷的含量测定［J］．延边大学医学学报，2013，36（4）：271-273

［4］杨连梅，胡荣，齐文，等．藏药狭叶红景天化学成分研究［J］.中国药剂学，2011，20（5）：154-158

［5］张榕文，任杰麟，蒋日琼，等.高效液相色谱法测定中药洗发水中红景天苷的含量［J］.应用化工，2014，43（12）：2295-2297

The Determination of Salidroside by HPLC

FAN Gui-qiang1，WANG Zhi-jie2，LI Tong3，QI Shan-hou2，PANG Hong-xia1，SUN Jin-xu2，LIU Jia2
（1.Hengshui Centre for Food and Drug Control，Hengshui 053000，Hebei，China；2.Hengshui University，Hengshui 053000，Hebei，China；3.The Service Center for Science and Technology Workers of Hengshui，Hengshui 053000，Hebei，China）

The salideroside content in rhodiola by HPLC was determined.The result showed that the method for the determination of salideroside content maximum standard deviation was 0.27%，the linear regression equation Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），the regression equation in the range 1 mg/mL～100 mg/mL.The spike recoveriesforergosterolwerebetween98.39%-101.15%.Thecontentofsalidrosideinrhodiolawas3.14g/100 g.

HPLC；rhodiola；salideroside

2015-09-30

衡水市科技局指令性课题（14032）

范桂强（1978—），男（汉），副主任药师，本科，主要从事化学药品检测检验研究。