黄文俊，李涛，范学慧，余奕言，杨艳，曾晓荣，谭晓秋

（西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、四川省心血管疾病防治协同创新中心，四川泸州646000）

论著

Flag和GFP双标记的SK2通道表达质粒的构建、鉴定和序列分析*

黄文俊，李涛，范学慧，余奕言，杨艳，曾晓荣，谭晓秋

（西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、四川省心血管疾病防治协同创新中心，四川泸州646000）

目的：采用Overlapping PCR（重叠PCR）法进行人源SK2通道Flag和GFP融合表达质粒的构建，为下一步胞外运用Flag抗体进行SK2通道的转运调控研究奠定基础。方法：在既往克隆的人SK2通道基因的表达质粒pIRES-SK2的基础上，采用重叠PCR法构建Flag和GFP双标签标记的表达质粒pEGFP-N3-Flag-SK2（简写为Flag-SK2-GFP）。结果：构建的表达质粒Flag标签插入SK2通道的S1-S2胞外环区域，GFP标签连接SK2通道胞内的C末端，通过酶切、测序等证实质粒构建成功。结论：成功构建人心房肌SK2通道基因表达质粒Flag-SK2-GFP，为下一步研究SK2通道转运过程及调控机制奠定了基础。

小电导钙激活钾通道；重叠PCR；基因工程

近年来，小电导钙激活钾通道（small conductance calcium activated potassium channels,SK2）在人心房肌上被发现并且证明其在心肌细胞的复极化过程中扮演重要的角色[1-3]。由于SK2通道在心房肌的表达原高于心室肌，因此，寻找针对SK2通道调控的靶点将为房性心律失常（如心房颤动）的治疗提供新的思路[4-7]。对SK2通道的深入研究，尤其是调控机制的研究就显得尤为重要。目前异源表达表达离子通道在工具细胞如HEK293，CHO等已成为研究离子通道功能活动和药物筛选的主要方法之一，本研究旨在采用重叠PCR方法进行含标签的表达质粒的构建，为下一步研究SK2通道蛋白的转运过程以及功能活性奠定基础。……