于小龙,　徐　进,　张　昊,　许景升,黄　雯,　胡晓梅,　冯　洁*,　王学利

(1. 天津农学院园艺园林学院, 天津　300384; 2. 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京　100193)



PMA-PCR方法快速检测VBNC状态青枯菌

于小龙1,2,徐进2,张昊2,许景升2,黄雯2,胡晓梅2,冯洁2*,王学利1*

(1. 天津农学院园艺园林学院, 天津300384; 2. 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京100193)

青枯菌为应对逆境胁迫,可进入活的但非可培养状态(viablebutnon-culturable,VBNC)。本文利用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立了一种快速有效区分青枯菌死活细胞的分子检测方法。基于hrcS基因序列,设计了一对青枯菌种特异性检测引物hrcSf/hrcSr;利用PMA对青枯菌Po82菌株的细胞悬浮液样品进行预处理,随后进行常规PCR扩增。结果表明,当样品中PMA质量浓度为3μg/mL、曝光时间大于5min时,PMA可有效抑制死亡菌体细胞中的DNA扩增;且对可培养和VBNC状态细胞中的DNA扩增没有影响;本试验建立的PMA-PCR方法能有效对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测,避免了假阳性与假阴性结果的产生。

青枯菌;叠氮溴化丙锭;活的非可培养状态

茄科雷尔氏菌[Ralstonia solanacearum (Smith, 1896)Yabuuchietal. 1996]简称青枯菌,引起植物细菌性青枯病。青枯菌可以侵染54个科,超过450种寄主植物,包括马铃薯、香蕉、番茄、烟草、豇豆、花生、腰果、木瓜、油橄榄和生姜等诸多重要粮食及经济作物[1]。在我国,青枯病自20世纪30年代首次于长江中下游地区被报道以来,目前已向南扩散至20°N的海南省、向北扩散至42°N河北坝上地区[2],成为我国农业生产上的重要限制因子。……