刘 玲, 柯皓天, 吕 银, 陈仁芳

(1.四川省丝绸科学研究院，四川成都 610031；2.四川省丝绸工程技术研究中心，四川成都 610031；3.西南大学生物技术学院，重庆 400716)



一种用于桑RAD-Seq高通量测序的基因组DNA提取方法

刘 玲1, 柯皓天1, 吕 银2, 陈仁芳3*

(1.四川省丝绸科学研究院，四川成都 610031；2.四川省丝绸工程技术研究中心，四川成都 610031；3.西南大学生物技术学院，重庆 400716)

[目的]筛选一种能够得到高质量桑树基因组DNA的方法。[方法]采用天根试剂盒法(Plant Genomic DNA Kit 离心柱型)，并稍加改进，从11个桑种的新鲜嫩叶中提取DNA。[结果]该方法简单快速，不需要复杂仪器，且能有效地除去桑叶中的多糖、多酚、蛋白质等杂质，得到的DNA能够满足RAD-Seq高通量的测序要求。[结论]建立了一种用于桑RAD-Seq高通量测序的基因组DNA提取方法。关键词桑树；RAD-Seq；基因组DNA提取

高质量基因组DNA通常用于构建基因组文库、Southern杂交及PCR分离基因等。因此，选用合适的提取方法获取高质高量DNA非常重要[1]。RAD-Seq，即限制性酶切位点相关DNA的测序技术，是利用限制性内切酶对基因组进行酶切，产生一定大小的片段，构建测序文库，对酶切后产生的RAD片段进行高通量测序[2]。常用的植物基因组DNA提取方法有CTAB法[3]和SDS法[4]，但利用这2种方法得到的桑DNA很难满足RAD-Seq测序的要求。桑RAD-Seq高通量测序对总DNA浓度的要求较高。桑树组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类等杂质，利用常用的提取方法很难得到高质量的DNA。笔者利用该方法能够得到较纯的桑树基因组DNA，满足RAD-Seq测序要求。

1　材料与方法

1.1试验材料供试材料为中国桑……