王子剑　 孙　丹 　于　颖 　张　岩　 王　超

(林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)，黑龙江 哈尔滨 150040)



白桦扩展蛋白基因的克隆分析及植物表达载体构建

王子剑 孙丹 于颖 张岩 王超

(林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)，黑龙江 哈尔滨 150040)

从白桦中分离了4条扩展蛋白家族基因全长cDNA序列和2条大于400 bp的部分cDNA序列，命名为BpEXP1～BpEXP5和BpEXPL，其中4个全长cDNA推导蛋白氨基酸残基数为186～258个，编码蛋白的分子量为20.07～27.80 kDa，理论等电点为5.57～9.20。氨基酸序列分析结果表明：5个alpha- expansin序列有共同的结构特征，即在N-末端有8个保守的半胱氨酸残基的丰富域，C-末端有4个保守的色氨酸残基的丰富域，中间有1个组氨酸功能域。利用Real time RT-PCR分析EXP家族基因在白桦不同器官和组织内的表达模式，结果表明：6个EXP基因在白桦的不同器官和组织中有着不同的表达水平，其中BpEXP1在分生木质部中表达量最高，推测其与木材形成过程的细胞壁修饰相关；BpEXP3在发育的蒴果中表达量最高，推测其与果实和种子发育过程中的细胞壁修饰相关。最后选择BpEXP1和BpEXPL基因，构建了pROKⅡ-BpEXP1和pROKⅡ-BpEXPL植物表达载体。

白桦；扩展蛋白；序列分析；Real time RT-PCR；载体构建

扩展蛋白(expansin, EXP)是第1个被鉴定的细胞壁疏松蛋白，部分诱导pH 调控植物细胞壁的伸展和细胞的生长[1-2]。EXP是1个基因大家族，目前已发现的EXP被分为4个亚家族，即α、β、γ和δ亚家族[3-5]。与最早发现的黄瓜(Cucumissativus)EXP在系统发生上相似的EXP蛋白称为α-expansin(EXPA)，而与禾本科花粉Ⅰ型过敏原在系统发生上相似的EXP蛋白称为β- expansin(EXPB)，另外一些植物EXP蛋白，他们与EXPA和EXPB相似，这些蛋白被命名为EXP相似蛋白和相关蛋白(EXLA和EXLB)[6]。……