周文平

基础研究

小鼠主动脉内皮细胞MEF2A RNA干扰对PAI-1表达的影响

周文平

目的 观察肌细胞增强因子2A（MEF2A）RNA干扰对小鼠主动脉内皮细胞MEF2A表达的影响及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）表达的影响。方法 构建MEF2A RNA干扰慢病毒和阴性对照慢病毒（NC），并对小鼠主动脉内皮细胞进行慢病毒转染，然后把主动脉内皮细胞分为MEF2A RNAi组、慢病毒阴性对照组（NC组）和对照组，取细胞培养上清液，应用ELISA和逆转录-聚合酶链反应检测MEF2A及PAI-1表达的变化。结果 慢病毒转染MEF2A RNA干扰组PAI-1浓度为（2.45±0.16）ng/ml，病毒转染对照组（NC组）PAI-1浓度为（1.23±0.13）ng/ml，对照组 PAI-1浓度为（1.35±0.10）ng/ml，MEF2A RNA 干扰组与 NC 组、对照组相比，P<0.05；NC组与对照组相比，P＞0.05。MEF2A RNA干扰明显降低MEF2A活性及其mRNA表达，显著促进小鼠主动脉内皮细胞PAI-1的活性及其mRNA表达。结论 慢病毒介导的MEF2A RNA干扰可明显抑制小鼠主动脉内皮细胞MEF2A的表达，并促进血管细胞内PAI-1的高表达。

肌细胞增强因子2A； RNA干扰； 纤溶酶原激活物抑制剂-1

肌细胞增强因子2A（myocyte enhancer factor2A，MEF2A）是目前研究较多的与动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）相关的生物活性物质。肌肉细胞中MEF2A转录因子可与多数肌肉特异性基因调控区富含A/T的序列相结合，调控其靶基因转录，在血管生长发育过程中起重要作用[1]。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种可以高效特异地阻断特定基因的表达基因治疗方法，目前已经广泛地应用于体内外基因功能的研究。本研究应用体外合成 MEF2A短发夹 RNA（small hairpin RNA，shRNA）转染小鼠主动脉内皮细胞，高效特异性地抑制MEF2A的表达，观察MEF2A RNA干扰对MEF2A表达及细胞因子PAI-1表达的影响，为预防AS的发生提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞来源 本实验中所用的细胞为小鼠主动脉内皮细胞（mouse aorta：normal aortic endothelial Cells），购自江苏江阴齐氏生物科技有限公司。细胞的培养采用江苏江阴齐氏生物科技有限公司专利产品小鼠主动脉内皮细胞培养试剂盒（Mouse Aorta PrimaCellTM：Normal Aortic Endothelial Cells Cat No.3-4197）来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。……