古秋莉，黄聪琳，姜　华甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；甘肃省中医药研究院

镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异免疫功能的影响*

古秋莉1，黄聪琳1，姜华2
1甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2甘肃省中医药研究院

目的：探讨藏药镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。方法：将60只昆明种小鼠随机分为6组：正常组，模型组，镰形棘豆黄酮苷元高、中、低剂量组（336、168、84mg/kg）和盐酸左旋咪唑组（25mg/kg），每组10只。镰形棘豆黄酮苷元高、中、低剂量组分别灌胃给予不同剂量的黄酮苷元，正常组和模型组灌服等体积5%吐温-80溶液，共10天。第8天开始，以注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型，除正常组腹腔注射生理盐水外，其他各组分别腹腔注射环磷酰胺，共3天。采用巨噬细胞碳粒廓清实验、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、免疫抑制小鼠器官指数的测定方法，观察镰形棘豆黄酮苷元对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。结果：与模型组比较，镰形棘豆黄酮苷元各剂量组能有效提高免疫抑制小鼠的吞噬百分率、廓清指数（K）和吞噬系数（α），差异有统计学意义（P＜0.05），增加免疫器官脾脏和胸腺的器官指数，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：镰形棘豆黄酮苷元能够增强环磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠非特异性免疫功能。

镰形棘豆；黄酮苷元；非特异性免疫；动物实验；小鼠；环磷酰胺

镰形棘豆（Oxytropis falcata B un g e）为豆科棘豆属植物。具有清热解毒、生肌愈疮、涩脉止血、通便之功效，常用于疫疠、黄水病、便秘、炭疽等病的临床治疗。镰形棘豆主要产于我国的青海、甘肃南部、四川西部。《晶珠本草》及《中华人民共和国卫生部药品标准（藏药）》（第一册）［1-2］均有收载。近年来，已有的研究成果表明，镰形棘豆中黄酮类化合物是镰形棘豆的主要活性成分之一，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、镇痛和提高机体免疫活性等功效［3-8］。此外，有研究发现镰形棘豆黄酮苷元具有治疗慢性支气管炎的生物活性［9］，有研究［10］报道了镰形棘豆黄酮苷元对慢性气管炎祛痰作用的良好疗效这些生物活性是否与黄酮苷元对机体免疫功能有相关性，目前尚未证实。本实验采用环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠，观察了镰形棘豆黄酮苷元对受试小鼠的免疫调节作用，探讨其对非特异性免疫功能的影响，为进一步的药效研究提供实验数据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1药物镰形棘豆：采自甘肃省甘南藏族自治州合作地区，经鉴定为镰形棘豆；镰形棘豆黄酮苷元：由甘肃省中医药研究院中药研究所制备；盐酸左旋咪唑片（南京白敬宇制药有限责任公司生产，批号：120101）；环磷酰胺注射液（山西普德药业有限公司生产，批号：0412076）。

1.1.2试剂二甲基亚砜（D M S O）（天津马克生物技术有限公司生产）、印度墨汁、补体（青岛绿谷有限公司生产，批号：20140120）。鸡红细胞悬液制备：抽取鸡血于烧杯中，立即用毛刷搅拌出纤维蛋白，慢慢倒入离心管中，加入生理盐水摇匀，以1500 r/分钟离心10分钟，反复洗涤3次，用无菌生理盐水配制成2%鸡红细胞悬液，4℃冰箱保存备用。

1.1.3仪器A R II40/C电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司提供），U V-1800紫外可见分光光度计（日本岛津分析仪器公司提供）。

1.1.4动物昆明种小鼠，雌雄各半，20～22 g，购于兰州大学实验动物中心，生产许可证号：S C X K（甘）2009-0004。实验前，所有实验动物被分组放入塑料鼠笼，适应性饲养7天（温度23～25℃，湿度50%～60%），喂食普通鼠饲料和蒸馏水。

1.2方法

1.2.1动物分组与给药取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组：空白组、模型组、左旋咪唑组、镰形棘豆黄酮苷元（高、中、低）剂量组，每组10只。空白组：生理盐水；模型组：5%吐温-80溶液；左旋咪唑组：左旋咪唑（25mg/k g）；镰形棘豆黄酮苷元组分别：336、168、84mg/k g，以5%吐温-80制成混悬液；各组按剂量灌胃给予相应药物，1次/d，共10天。第8天开始，灌胃后，空白组腹腔注射生理盐水，其他各组小鼠腹腔注射50mg/（k g·d）环磷酰胺注射液，1次/d，连续3天。

1.2.2小鼠网状内皮系统吞噬功能实验各组按“1.2.1”项剂量给药，末次给药l小时后，分别由尾静脉准确注入用生理盐水稀释5倍的印度墨汁10mL/k g，于2分钟及20分钟分别自眼眶后静脉丛取血，吸取20μL，加入到0.1%碳酸钠溶液2.5mL中，充分混匀，以0.1%碳酸钠溶液为空白，紫外分光光度计在680 n m处测定光密度（OD），将采血后的小鼠处死，取其肝脏、脾脏，称体质量。计算廓清指数K和吞噬系数α值。K=（l g OD1-l g OD2）/ （t1-t2），α=K1/3W/W L S。其中W L S为肝脾合重，W为体质量，t1、t2为注射墨汁采血后的时间，OD1、OD2为采血后分别所测的OD值。

1.2.3小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验各组按“1.2.1”项剂量给药，第3天开始给药后每只小鼠腹腔注射2%鸡红细胞悬液1.0 mL，1次/d，连续5天。末次给药1小时后，摘眼球取血，并分离血清，取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1mL加2%鸡红细胞生理盐水悬液，与10%补体0.5mL混匀，于37℃孵箱温育30分钟后，0℃冰箱终止反应。离心，取上清液于分光光度计540 n m处比色，测定OD值，设不加血清的空白做对照，计算巨噬细胞吞噬率：

吞噬率（%）=（空白组OD值-吞噬后OD值）/空白组OD值×100%

1.2.4小鼠免疫器官指数的测定各组按“1.2.1”项剂量给药，在给药第 1、2、3、7天，除空白组外，其余各组小鼠均腹腔注射50mL/k g环磷酰胺注射液，诱导免疫功能低下模型。末次给药l小时，称体质量后，脱颈处死大鼠，取胸腺和脾脏，用生理盐水洗净，除去筋膜称体质量，计算胸腺指数和脾脏指数。

器官指数=器官质量/体质量

1.3统计学方法实验数据用S P SS 17.0软件包进行统计，所有数据均以（±s）表示，采用独立样本t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1对免疫抑制小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响与空白组比较：模型组，左旋咪唑组，黄酮苷元高、中、低剂量组的廓清指数和吞噬系数明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较：用药各组廓清指数和吞噬系数均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），但黄酮苷元各组的作用没有左旋咪唑组强。见表1。

表1　各组小鼠网状内皮系统吞噬功能测定结果（±s）

表1　各组小鼠网状内皮系统吞噬功能测定结果（±s）

注：*表示与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；△表示与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

组别　只数　廓清指数K（1×10-2）　吞噬系数α空白组　10　7.12±1.84　8.20±0.59模型组　10　3.10±1.21*　5.81±1.14*左旋咪唑组　10　6.62±1.57*△　7.76±0.99*△黄酮苷元高剂量组　10　5.90±0.61*△　7.16±0.94*△黄酮苷元中剂量组　10　5.17±0.90*△　6.82±1.02*△黄酮苷元低剂量组　10　3.94±1.12*△　6.39±0.72*△

2.2对免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬率的影响小鼠胃饲各组药物后，与空白组和模型组比较，各组腹腔巨噬细胞的吞噬率均明显提高，黄酮苷元高剂量组明显高于中、低剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　各组小鼠巨噬细胞吞噬功能测定结果

2.3对免疫抑制小鼠免疫器官指数的影响与空白组比较：除左旋咪唑组外，模型组、黄酮苷元高、中、低剂量组的脾脏指数和胸腺指数均明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较：黄酮苷元各组脾脏指数和胸腺指数均明显增大，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3　各组小鼠免疫器官指数测定结果（±s）

表3　各组小鼠免疫器官指数测定结果（±s）

注：*表示与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；△表示与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

组别　只数　脾脏指数　胸腺指数空白组　10　5.92±1.00　5.48±0.80模型组　10　3.49±0.84*　3.24±1.12*左旋咪唑组　10　5.83±1.23△　5.32±0.92*△黄酮苷元高剂量组　10　5.54±1.01*△　4.88±0.82*△黄酮苷元中剂量组　10　4.61±1.16*△　4.13±1.11*△黄酮苷元低剂量组　10　3.98±0.87*△　3.67±1.25*△

3　讨论

胸腺和脾脏是人体重要的免疫器官，免疫器官指数能很好地反映机体免疫器官的重量变化，且能将个体差异的影响降低到最低限度，常以药物对免疫器官的增重作为衡量其免疫功能强弱的指标之一。而网状内皮系统是机体最重要的防御系统，它具有强大而迅速的吞噬廓清异体颗粒和某些可溶性异物的能力，并能迅速清除体内自身产生的有害物质，在机体的免疫应答中具有重要作用，其功能的强弱可由巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数直接反映。环磷酰胺为临床上常用的化疗药物，应用后可造成机体的免疫抑制。此实验中小鼠腹腔注射环磷酰胺后，模型组与正常组相比，免疫器官各指标均显著降低，反映了免疫功能受到抑制。

本实验结果提示：镰形棘豆黄酮苷元具有一定的免疫增强作用，可以促进小鼠脾脏及胸腺细胞的增殖，增加小鼠抗体生成器官脾脏及胸腺的质量，提高小鼠的吞噬活性以及吞噬指数，促进小鼠鸡红细胞免疫后脾细胞血清溶血素的形成。此外，其免疫功能增强效应与剂量呈正相关。

［1］ 罗达尚.中华藏本草［M］.北京：民族出版社，1997：139.

［2］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药品标准（藏药）第一册［M］.北京：人民卫生出版社，1995：101.

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［6］ 杨光明，张芳芳，王栋，等.镰形棘豆对SMMC-7721肝癌细胞增殖及MMP-2表达的影响［J］.中国中药杂志，2011，36（9）：1227-1230.

［7］ 代现平，张光辉，班翠红，等.镰形棘豆总提取物的镇痛抗炎作用［J］.中国生化药物杂志，2010，31（5）：313-315.

［8］ 瞿敏明，陈志鹏，刘丹，等.镰形棘豆提取物经皮给药的抗炎镇痛活性［J］.中草药，2011，42（9）：1788-1791.

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The Im pactof Flavonoid G lycosides Extracted from LianXing JiDou on Nonspecfic Imm une Function of theM icew ith Imm unodepression

GU Qiuli1，HUANG Conglin1，JIANGHua2
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Gansu Provincial Academy of Chinese Medicine

Objective：To explore the influence of flavonoid glycosides extracted from Tibetan medicine LianXing JiDou（Oxytropis falcata Bunge）on nonspecific immune function of them ice w ith immunodepression. Methods：Sixtym icewere random ized into six groups：the normalgroup，the controlgroup，high，moderate and low doses groups of flavonoid glycosides extracted from LianXing JiDou（336，168 and 84mg/kg）and levamisole hydrochloride group（25mg/kg），tenmice each group.High，moderate and low doses groups of flavonoid glycosides extracted from LianXing JiDou began to accept intragastric administration of flavonoid glycosides in different doses respectively，the mice in the normal group and the model group were drenched w ith the same amount of 5% tween-80 solutions，for ten days.Themicemodelswith immunodepression were prepared by injecting cyclophosphamide since the eighth day，except the normal group received peritoneal injection of physiological saline，other groups accepted peritoneal injection of cyclophospham ide for three days.The influence of flavonoid glycosides extracted from LianXing JiDou on nonspecific immune function of immunodepressionm icewas observed by adopting macrophage carbon clearance test，macrophage phagocytosis of chicken red blood cells and detecting organ indexes of immunodepressionm ice.Results：Compared w ith themodelgroup，differentdoses groupsof flavonoid glycosides extracted from LianXing JiDou could effectively improve phagocytic percentage，clearance rate index（K）and Phagocytic coefficient（α）the differencehad statisticalmeaning（P＜0.05），increaseorgan indexesof the spleen and thymusgland，and the difference showed statisticalmeaning（P＜0.05）.Conclusion：Flavonoid glycosidesextracted from Tibetan medicine LianXing JiDou could enhance nonspecific immune function of cyclophosphamide-induced immunodepressionmice.

LianXing JiDou；flavonoid glycosides；nonspecific immune function；animalexperiment；themice；cyclophospham ide

R285.5

A

1004-6852（2016）04-0014-03

2015-11-17

国家自然科学基金项目（编号81260633）。

古秋莉（1964—），女，副主任药师。研究方向：医院药学。