余婧婷， 孟焕新， 刘凯宁

(北京大学口腔医学院·口腔医院1.牙周科，2.综合科　口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室　口腔数字医学北京市重点实验室, 北京　100081)



·技术方法·

改良人牙龈上皮细胞原代培养方法

余婧婷1,2， 孟焕新1△， 刘凯宁1

(北京大学口腔医学院·口腔医院1.牙周科，2.综合科口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室口腔数字医学北京市重点实验室, 北京100081)

目的：建立稳定的人牙龈上皮细胞的原代培养方法，为牙周组织的细胞学研究提供可靠的细胞来源，对原有的原代培养方法进行了改良，期望达到培养成功率高、原代培养时间短且操作简便的效果。方法： 选择行“冠延长术”的牙周相对健康者9人，取冠延长术切除的领圈牙龈组织进行牙龈上皮细胞的原代培养，培养方法包括改良酶消化法和组织块法。改良酶消化法使用2.5g/LDispaseⅡ酶(Ⅱ型分离酶)浸泡组织块过夜，将上皮与结缔组织分离，再用0.025%(质量分数)不含EDTA(乙二胺四乙酸)的胰蛋白酶静置消化上皮碎片10min，不弃去上皮碎片直接离心并重悬细胞，不仅降低了酶的消化浓度，减少了消化时间，还简化了重悬细胞的过程；组织块法相对以往方法并无改良。观察两种方法所培养原代细胞的生长过程，在培养成功后对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定，并比较两种方法的成功率和培养时间。结果： 改良后的酶消化法能够比较快地培养出细胞特征明确的人牙龈上皮细胞，成功率达88.9%，且细胞成片状生长，10～14d后可传代，传至3代后细胞形态逐渐不规则直至凋亡，而组织块法原代培养成功率虽然相同，但时间更长，17～22d后才可传代。……