刘滔滔，刘明瑞，刘恒嘉，杜丽琴，梁智群，韦宇拓**

(1.广西大学生命科学与技术学院，广西南宁　530005；2.亚热带农业资源保护与利用国家重点实验室，广西南宁　530005)



产碱假单胞菌碱性脂肪酶的克隆表达及酶学性质*

刘滔滔1,2，刘明瑞1,2，刘恒嘉1,2，杜丽琴1,2，梁智群1,2，韦宇拓1,2**

(1.广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530005；2.亚热带农业资源保护与利用国家重点实验室，广西南宁530005)

【目的】为获得可应用于酯类水解及合成的脂肪酶资源，本研究通过筛选分离得到能够水解长链脂肪酸酯的脂肪酶产生菌，克隆表达其脂肪酶基因并研究脂肪酶的酶学性质。【方法】从环境中筛选分离出可水解三硬脂酸甘油酯的菌株，利用16S rDNA对其进行分子鉴定，并扩增其脂肪酶基因和脂肪酶分子伴侣基因。以pET-22b(+)为表达载体，构建共表达重组质粒，转化Escherichia coli BL21(DE3)进行异源表达，并对重组酶进行酶学性质研究。【结果】经16S rDNA鉴定该菌株为产碱假单胞菌Pseudomonasalcaligenes。通过PCR成功克隆到该菌的脂肪酶基因(lipPA-9A)和脂肪酶分子伴侣基因(lipPA-9B)，并构建共表达重组质粒pET22b-lipPA-9A-9B，实现脂肪酶LIP-9A的活性表达。酶学性质研究表明LIP-9A的最适反应温度为35℃，最适反应pH值为10.5，最适反应底物为对硝基苯酚辛酸酯(pNPO)；同时，LIP-9A还可以催化醇和羧酸发生酯化反应产生酯类物质。【结论】LIP-9A在碱性条件下具有较高活力，且可以催化酯化反应，在洗涤行业和酯合成领域具有一定的应用价值。

产碱假单胞菌碱性脂肪酶共表达酯化

0　引言

【研究意义】脂肪酶(EC.3.1.1.3)又称为三酰基甘油酰基水解酶，是催化甘油三酯分解成甘油和脂肪酸的酯键水解酶[1]。……