黄建伟，田学智，张王娜，冯阳阳，叶 婷，魏素娇

HPV L1及P16蛋白在诊断宫颈鳞状上皮病变的应用及价值

黄建伟，田学智，张王娜，冯阳阳，叶 婷，魏素娇

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)主要衣壳蛋白L1(HPVL1)及P16蛋白的表达在宫颈鳞状上皮病变中的诊断及应用价值。方法 选取本院2015年1月至2015年10月HPV检测高危阳性的215名患者的常规病理切片，其中慢性宫颈炎101例，宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级60例，CINⅡ级27例，CINⅢ级21例，鳞状细胞癌(SCC) 6例，运用免疫组织化学染色检测各组活检标本中HPV L1、P16的表达，并对结果进行统计分析。结果 HPVL1蛋白在宫颈炎标本表达率为66.33%(67/101)，CINⅠ表达率为71.67%(43/60)，CINⅡ表达率为25.92%(7/27)，CINⅢ表达率为9.52%(2/21)，SCC表达率为0%(0/6)；P16蛋白在宫颈炎标本表达率为69.31%(70/101)，CINⅠ表达率为58.33%(35/60)，CINⅡ表达率为85.19%(23/27)，CINⅢ表达率为95.24%(20/21)，SCC表达率为100%(6/6)；HPVL1蛋白表达率在宫颈上皮病变中(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC)随着宫颈上皮病理分级升高而下降(P<0.05)，但炎症中的表达率与CINⅠ中的表达率无明显差异(P>0.05)；相反，P16蛋白表达率在宫颈上皮病变中随病理分级升高而升高，二者的表达成负相关(P<0.05)。结论 对于宫颈筛查HPV阳性的患者，联合检测HPVL1蛋白和P16蛋白的表达，有一定的诊断价值。

人乳头状瘤病毒；免疫组化；宫颈上皮病变

宫颈癌(squamous cervical carcinoma,SCC)是威胁女性健康的一种恶性肿瘤。近年来，宫颈癌的发病率逐年提高，发病年龄逐渐年轻化。目前认为宫颈癌的主要致病原因为人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染引起[1]，经过宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级最终发展为宫颈癌。从HPV感染到最终发展为宫颈癌的较长时期内，HPV的主要衣壳蛋白L1及细胞周期调节因子P16的表达与宫颈上皮病变的转归密切相关[2]。本研究探讨人乳头状瘤病毒(HPV)主要衣壳蛋白L1及P16蛋白的表达在宫颈鳞状上皮病变中的表达及其对宫颈癌诊断的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2015年1月至2015年10月宫颈脱落细胞学HPV病毒检测高危阳性且经过活检进一步确诊的215例患者作为研究对象，年龄22～55岁，其中活检组织病理学诊断为慢性宫颈炎101例，CINⅠ60例，CINⅡ27例，CINⅢ21例，SCC 6例。

1.2 研究方法 将215例HPV筛查高危阳性患者的石蜡包埋组织做厚度为4 μm连续切片，用免疫组织化学染色方法检测HPVL1和P16的表达。主要试剂：赛泰细胞/组织HPVL1检测试剂盒(艾迪旺斯医疗科技有限公司，美国)，P16单克隆抗体试剂盒(福州迈新生物科技公司，中国)；德国罗氏全自动免疫组化染色机。所有免疫组化步骤按试剂盒质控标准进行。

1.3 统计学分析 采用SPSS 18.0分析软件处理数据，计数资料以构成比(%)表示，组间比较采用χ2检验，并进行相关性分析来检测两者之间是否具有相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPVL1蛋白的表达 HPVL1蛋白阳性褐色信号定位于细胞核。在炎症组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组的阳性率分别为66.33%、71.67%、25.92%、9.52%、0%，随着宫颈鳞状上皮病变程度的增加，HPVL1阳性率下降，鳞状细胞癌组不表达，炎症组与CINⅡ组、CINⅢ组和鳞状细胞癌组各组阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)，而炎症组与CINⅠ组的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 P16因子的表达 P16蛋白阳性褐色信号定位于细胞核。炎症组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组阳性率分别为69.31%、58.33%、85.19%、95.24%、100%。随着宫颈上皮病变程度的增加，P16阳性率增加。炎症组与CINⅡ组、CINⅢ组和鳞状细胞癌组各组阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05)，而炎症组与CINⅠ组的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 HPVL1与P16联合表达情况 HPVL1和P16在宫颈鳞状上皮病变中的表达存在如下4种情况：HPVL1+/P16+、HPVL1+/P16-、HPVL1-/P16+和HPVL1-/P16-，综合以上4种情况的表达，P16-/HPVL1+的情况主要出现在炎症和CINⅠ级，与其他各组均有差异(P<0.05)；P16-/HPVL1-的表达情况在所有组间无明显差别(P>0.05)；P16+/HPVL1-在炎症组和CINⅠ组中显著高于其他组(P<0.05)，P16+/HPVL1+在CINⅡ、CINⅢ、SCC组显著高于炎症组和CINⅠ组(P<0.05)。说明当HPVL1阳性时，患者病情较轻，或者仅位于宫颈癌变早期，当P16阳性时，患者病情较重，已位于宫颈病变晚期，HPVL1和P16 之间为负相关关系(P<0.05)，见表1。

表1 HPV L1、P16联合表达结果(n=215) 例(%)

注：HPV：人乳头癌病毒；CIN:宫颈上皮内瘤变；SCC：宫颈癌。

3 讨论

宫颈癌是发生在女性生殖道的恶性肿瘤之一，而HPV感染是其最主要的致病因素之一。从HPV感染到发生宫颈癌变将经历较长的时期。有研究表明，在这个时期内如果进行规范治疗，对于一些可逆的病变，如CINⅠ级、CINⅡ级，治愈率可达到98%，否则小部分CINⅡ级和CINⅢ级的患者可能发展成宫颈癌。因此，早期进行科学规范的临床干预对宫颈癌的转归有极其重要的意义。

HPV病毒是20面体立体结构，呈球形，无包膜，病毒基因组是双链环状DNA，包含3个功能区：早期转录区、晚期转录区和非转录区(控制区)。其中，晚期转录区又称为L区，编码两个衣壳蛋白即主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2，共同组成病毒的衣壳，保护病毒DNA结构不受核酸酶的破坏，并与病毒的侵袭和增殖有关[3]。L1蛋白高度保守，是最主要的特异性抗原，在病毒感染宫颈上皮细胞过程中，L1蛋白首先与靶细胞的膜受体结合，并与L2蛋白协同将病毒DNA转运至胞质和胞核内。免疫力正常时病毒DNA处于游离状态，在机体免疫力下降时，病毒颗粒就会整合到宿主细胞的DNA中。在病毒DNA整合到宿主细胞核染色体后L1蛋白逐渐消失，而宫颈上皮不典型增生将进入发展阶段。因此，HPVL1蛋白的表达水平反映了病毒的感染状态，本研究结果中显示，随着CIN等级的升高，HPVL1的阳性率逐渐降低，CINⅡ、CINⅢ和SCC组中HPVL1阳性表达率显著低于炎症组和CINⅠ组(P<0.05)。

P16是抑癌基因1NK4a编码的抑癌蛋白，P16通过抑制视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，pRb)的磷酸化，阻断细胞增殖周期G1期向S期转化，抑制细胞增殖。本研究显示P16蛋白阳性表达随宫颈上皮病变程度的增加而逐渐升高。而P16在肺癌、乳腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤中的表达则相反。因为在细胞增殖周期级联调节机制中， pRb负反馈调节P16蛋白的表达，在高危型HPV感染的宫颈上皮中，HPV DNA早期转录区表达蛋白E7结合pRb，使其失活，丧失了对P16-1NK4a基因的负反馈抑制[4]，造成P16的过表达。

本研究显示HPVL1和P16-联合表达对判断宫颈病变等级及生物学行为具有一定临床意义。P16-/HPVL1+的情况主要出现在炎症和CINⅠ级，与其他各组有差异(P<0.05)；P16+/HPVL1-在炎症组和CINⅠ组中显著高于其他组(P<0.05)，P16+/HPVL1+在CINⅡ、CINⅢ、SCC组显著高于炎症组和CINⅠ组(P<0.05)。因此，认为P16-/HPVL1-和P16-/HPVL1+属于病变程度较轻，不易进展，可以定期随访；对于P16+/HPVL1-和P16+/HPVL1+则认为病变程度比较重，说明病毒DNA已经整合到宿主DNA中，应当予以治疗，否则将发展成SCC。综上，对于HPV筛查高危阳性的患者，联合检测HPVL1蛋白和P16蛋白的表达，有一定的诊断价值。

[1] McMurray HR,NguyenD,Westbrook TF,et al.Biology of human papillomavirus[J].Int J Exp Pathol,2001,82(1):15-33.

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[3] Pereira R,Hitzeroth II,Rybicki EP.Insights into the role and function of L2,the minor capsid protein of papilloma viruses[J].Arch Virol,2009,154(2):187-197.

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Value of Diagnosis Cervical Squamous Epithelial Lesions with HPV L1 and P16 Protein

HUANG Jian-wei, TIAN Xue-zhi, ZHANG Wang-na, FENG yang-yang, YE Ting, WEI Su-jiao

(Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Luoyang 471000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of major capsid protein L1 and P16 protein in the human papilloma virus (HPV), and determine its value in the diagnosis and application of cervical squamous epithelial lesions.Methods215 cases of high risk with HPV positive expression were collected from Luoyang Central Hospital，whicht including 101 cases of chronic cervicitis, 60 cases of CIN grade Ⅰ, 27 cases of CIN grade Ⅱ, 21 cases of CIN grade Ⅲ and 6 cases of squamous cell carcinoma (SCC). Immunohistochemical staining was used to detect the expression of HPV L1 and P16 protein of all cases.ResultsThe expression rate of HPVL1 protein in cervicitis, CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ and SCC were 66.33%(67/101), 71.67%(43/60), 25.92%(7/27), 9.52%(2/21) and 0%(0/6), respectively. The expression rate of P16 protein in cervicitis, CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ and SCC were 69.31%(70/101), 58.33%(35/60), 85.19%(23/27), 95.24%(20/21) and 100%(6/6) , respectively. The rate of expression of HPVL1 protein in cervical intraepithelial lesions (CIN Ⅰ and CIN Ⅱ, CIN Ⅲ, SCC) decreased with the increasing of pathological grade of cervical epithelium (P<0.05), but there was no significant difference between cervicitis and CIN I (P>0.05). On the contrary, the expression rate of P16 in cervical intraepithelial lesions increased with the increasing of pathological grade. It was a negative correlation between the expression of the two proteins (P<0.05).ConclusionCombined detection of HPV L1 and P16 protein had a certain diagnostic value in cervical disease screening with HPV positive patients.

human papilloma virus; immunohistochemistry; cervical intraepithelial neoplasia

1672-688X(2016)04-0259-03

10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.04.

2016-09-08

郑州大学附属洛阳市中心医院病理科，河南洛阳 471000

黄建伟(1980-)，男，河南商丘人，主治医师，从事病理诊断工作。

R711.74；R373

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