张海燕（三河市畜牧水产局河北三河065200）

学术研究

甘草添加剂对绵羊支气管黏膜中杯状细胞数量及IgA分泌量的影响

张海燕
（三河市畜牧水产局河北三河065200）

本实验通过探究甘草的主要药理作用，对其药用价值和发挥药效的主要成分进行进一步研究，研究甘草添加剂对绵羊呼吸道系统免疫功能的影响。

甘草添加剂；支气管黏膜；杯状细胞；IgA

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.7.043

1　试验方法

1.1甘草粉的制备

称取150 g的甘草粉，置于烧杯中，第1次加1 000 mL蒸馏水浸泡1 h后煎煮，加热至沸后文火维持30 min，用4层纱布过滤，滤出煎液，滤渣用500 mL水量再煎煮2次，合并3次滤液，浓缩至500 mL，置4℃冰箱保存备用。将以上各溶液测定前分别用0.45μm微孔滤膜过滤，留滤液备用，用液相色谱法测定甘草酸含量。

1.2试验动物分组

将试验用绵羊随机分为三组，每组4只，分别为空白对照组、低剂量组和高剂量组。实验组绵羊每只每日早上饲喂甘草粉与精料混合物。空白对照组所饲喂的精料中不加甘草粉，连续饲喂30 d。

1.3杯状细胞体积及数量的检测

具体步骤：取材→固定→蒸馏水冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→捞片→烤片→脱蜡→蒸馏水冲洗→用阿尔新蓝染液染色（30 min）→流水冲洗（2 min）→蒸馏水漂洗→苏木素复染→脱水→透明→封片→显微镜观察、照相。

1.4IgA分泌量的检测

1）放血处死绵羊，使用手术刀将肺组织切成1.5 cm×1 cm×0.3 cm左右的小块，用10%中性福尔马林固定24 h后修块到适当大小，再固定14 d。

2）将固定好的组织块用自来水冲洗2 d，然后进行脱水、透明、浸蜡，具体操作步骤如下：组织块→50%乙醇（2～3 h）→60%乙醇（2～3 h）→75%乙醇（2～3 h）→85%乙醇（2～3 h）→95%乙醇（1 h）→100%乙醇（40 min）→二甲苯、乙醇（1∶1）（30 min）→二甲苯（30 min）→52℃蜡杯（60 min）→55℃蜡杯（60 min）。……